(二) 理化鉴别

中药制剂的理化鉴别系指用物理的或化学的方法对制剂中所含的化学成分进行定性鉴别，从而判断其真伪的方法。中药制剂常用的理化鉴别方法有：物理鉴别、化学鉴别(沉淀反应和显色反应)、升华法鉴别、光谱鉴别和色谱鉴别等，其中以薄层色谱法较为常用。

1. 一般理化鉴别

(1) 简述：《中国药典》中，药品的“一般鉴别试验”是归纳正文中含有同一离子或具有某一基团的药物共有的化学反应，作为各该药品正文鉴别项下的组成部分。此项内容是通过化学反应进行试验来证明药品中含有某一离子或基团，而不是对未知物进行分析。

1) 中药制剂中药材的化学成分：中药制剂为多种药材配制而成。每种药材所含的有效成分复杂。目前已知的有生物碱、苷类、挥发油、鞣质、糖类、氨基酸、蛋白质、多肽、黄酮类、蒽醌类、有机酸、内酯、香豆素等。因此，把中药材制成制剂后，可以利用这些成分的化学性质进行理化性质鉴别。

2) 提取分离：在进行化学方法鉴别时，丸剂、散剂、片剂、胶囊剂等固体制剂样品应根据检出成分的性质选择适当的溶剂进行提取分离：①采用50%～70%乙醇进行回流提取，可将多数化学成分不同程度的提取出来，然后选用有关成分的沉淀反应或显色反应进行鉴别；②用酸性乙醇溶液回流提取，酚类、有机酸、生物碱等成分将会被提取出来；③用水提取，室温浸泡，滤过，滤液可供检验氨基酸和蛋白质；④用60%热水提取，滤过，滤液可以检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及其他苷类成分；⑤用有机溶剂如乙醚提取，滤液可以检验酯、内酯、苷元；药渣挥去乙醚后，用甲醇回流提取，滤液可以检查各种苷类；⑥如制剂中含有可升华的成分，可直接利用升华法进行提取；⑦如含有挥发性成分，可直接用水蒸气蒸馏法进行提取；⑧液体制剂如注射剂、酊剂、糖浆剂、酒剂、合剂等，可以直接取样，或选用上述适当方法进行提取分离，制成供试品溶液。

3) 注意事项：①制备供试品溶液时，要注意除去中药制剂中的附加成分，如片剂的赋形剂，颗粒剂及糖浆剂的糖，注射剂的抗氧剂、增溶剂、止痛剂等，以排除对鉴别试验的干扰；②用于中药制剂鉴别试验方法的原则是：专属性强、重现性好、灵敏度高，操作方便、快速；③应慎重使用专属性不强的化学反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等；④颜色反应须在玻璃试管中进行，并注意观察颜色变化；⑤试验中需要蒸发时，应置于玻璃蒸发皿或瓷蒸发皿中，在水浴上进行；⑥有色沉淀反应宜在白色点滴板上进行，白色沉淀反应应在黑色或蓝色点滴板上进行，也可在试管或离心管中进行；⑦在采用阴性对照和阳性对照方法试验时，应对其鉴别方法进行反复验证，避免出现假阳性。

(2) 沉淀反应：将被测组分转化成难溶物，以沉淀形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、烘十或炽灼的过程，称为沉淀反应，最后称重，计算其含量的方法，称为沉淀法。沉淀法是重量分析法的一种。

以生物碱的沉淀反应为例：生物碱在酸性水溶液或酸性稀醇(<50%)中能与生物碱沉淀试剂生成难溶性沉淀。生物碱沉淀一般都是试剂分子的阴离子，与生物碱阳离子形成难溶性络合盐而产生沉淀。常用的生物碱试剂有碘化铋钾、碘化汞钾、硅钨酸等。该反应可预示生物碱可能存在，也可借此精制生物碱和协助鉴定生物碱。在试验时，通常选用两种以上不同的生物碱沉淀试剂进行试验，如均为正反应表示被检液中可能有生物碱存在。如需确证，则要进一步精制后，再行检验；如再次均呈正反应，即可判定有生物碱存在。如果第一次试验时就对两种沉淀剂均呈负反应，即可肯定无生物碱存在。

(3) 显色反应：中药中的多种成分，能与一定的显色试剂作用，产生具有特征性的颜色，如黄酮类化合物能与铝盐作用，蒽醌类成分可与醋酸镁、碱液显色等反应，这种反应称为显色反应。利用显色反应可对化合物进行定性鉴别。

1) 黄酮类化合物的显色反应：黄酮类化合物能与金属离子络合产生荧光或颜色加深，或生成沉淀。这些性质有的可用于黄酮类化合物的定性、定量，有的可用于它们的结构鉴定。黄酮类化合物的显色反应主要是利用分子中的酚羟基，即5-羟基(a)、3-羟基(b)、邻二羟基(c)、(a)、(b)与4位羟基共同与金属离子如Al³⁺、Pb²⁺、Mg²⁺、Zr⁴⁺、Sr²⁺、Be³⁺等形成络合物。形成的络合物有的产生荧光或颜色加深(如Al³⁺、Zr⁴⁺)，铝盐和锆盐能与大多数黄酮类化合物产生黄绿色荧光；有的产生沉淀(如Pb2+)。

2) 皂苷的显色反应：皂苷与浓硫酸显色是由于皂苷分子内发生脱水、脱羧、氧化、缩合、双键位移形成多烯阳离子而显色。将皂苷样品溶于醋酐中，加硫酸-醋酐(1：20)数滴，能产生显色变化。一般三萜皂苷由黄色转变为红色、紫色或蓝色，而甾体皂苷的颜色在发生上述颜色变化后，最后呈现绿色。皂苷的显色反应，可用于皂苷的鉴别。常用的皂苷显色剂：香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐-硫酸、高氯酸、浓硫酸等。

3) 香豆素类化合物的显色反应：香豆素类化合物结构中的羟基和芳环形成较强的共轭体系，在紫外光区具有较强的特征吸收，紫外吸收光谱一般在300nm左右(lgε为4左右)有最大吸收，吸收峰的位置与取代基有关。香豆素母核本身无荧光，而羟基香豆素在紫外光下大多都能显蓝色荧光。香豆素类的颜色反应可用于香豆素类的鉴别。由于香豆素类具有内酯环，内酯环在碱性条件下可开环，与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，然后再于酸性条件下与三价铁离子络合形成盐而显红色；具有酚羟基的香豆素类可与三氯化铁试剂产生颜色反应。

(4)升华法鉴别：同第一节微量升华法。升华物置显微镜下观察，具有一定的形状，或在可见光下观察具有一定颜色，或在紫外光下观察显出不同颜色的荧光，或者加-定试剂处理后显出不同颜色或荧光。制剂中若有2种以上的药味都含有升华物，而且升华的温度不同，则可控制加热的温度，分段收集升华物，分别进行鉴定。

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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