近年来,随着生物科学的快速发展,新技术新方法不断应用在食品微生物检验 领域的微生物计数、早期诊断、鉴定等方面,从而缩短了检测时间,提高了微生物检 出率。微生物快速检测方法涉及微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫 学和血清学等方面及它们的结合应用。例如;利用生化和微生物学原理制作的快 速测试片法、利用核酸特异序列原理发明的核酸探针法和基因芯片法、利用抗原抗 体结合的特异性发明的免疫磁球法、PCR等。食品中微生物的快速检测技术正在 迅猛发展,虽然很多技术仍然存在一定的问题,但作用明显。

沙门菌属肠道细菌科,包括那些食物中毒、导致肠胃炎、伤寒和副伤寒的细菌， 能引起食物传播性疾病,近年来已经成为最常见的食物中毒原因。检测沙门菌的 传统方法是将食物样品分步增菌以增加病原菌的检出率,这种培养方法总体可分 为三个不同阶段:预增菌、选择性增菌及分离步骤。沙门菌菌型繁多，已确认的沙 门菌有2500个以上的血清型。传统沙门菌检测法全过程需时至少4~7d才能得 出明确的诊断结果。

单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌) 是常见的食源性致病菌， WHO将其列为20世纪90年代四大食源性病原菌之一。单核细胞增生李斯特菌不但存在与食品原料中，在食品的加工、运输和冷冻保存的食品中均可存在，可造成多种食品的污染，如乳及乳制品、肉制品、腌腊食品、水产品、新鲜蔬菜等。人类受感染后可导致胃肠炎、败血症、脑膜炎、流产等。

繁杂的各类生化反应型使常规检验程序复杂繁琐，耗时费力，检验部门负担重。因此，快速而准确的检测方法显得尤为重要。

[检测原理]

样品做增菌处理，增菌液经加热处理后移入包被特异性抗体(一抗)的固相容器内，使日标菌与一抗结合，洗去未结合的其他部分；加入特异性酶标抗体(二抗)，再次洗去未结合的其他成分；加入特定底物与之反应，生成荧光化合物或有色化合物，通过检测荧光强度或吸光度，与参照值比较，得出检验结果。

[设备和材料]

酶联免疫分析仪(VIDAS仪或类似产品) ；

冰箱：2~8℃；

恒温培养箱：(30±1)℃、(36±1)℃、(42±1)℃；

均质器；

电子天平：量程0~500g，感量0.1g；

漩涡混合器；

恒温水浴锅；

灭菌设备。

[培养基、试剂盒]

(1)缓冲蛋白胨水(BP)按GB/T4789.28-2003中4.12的规定配制。

(2)氯化镁孔雀绿增菌液(MM)按GB/T4789.28—2003中4.13的规定配制。

(3) 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)按GB/T4789.28-2003中4.14的规定配制。

(4)亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)按CB/T4789.28-2003中4.16的规定配制。

(5) 改良肠道菌新生霉素增菌液(mEC+n)胰蛋白胨20.0g、3号胆盐1.12g、乳糖5.0g、无水磷酸氢二钾4.0g、无水磷酸二氢钾1.5g、氯化钠5.0g、蒸馏水1000mL。将上述成分溶于水后校正pH至6.9±1，分装后置121℃高压灭菌15min， 取出后冷却至室温， 加入过滤的新生霉素溶液， 使其终浓度为20mg/L。(6)盐酸吖啶黄溶液盐酸吖啶黄25mg、灭菌蒸馏水10mL，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌，避光保存。

(7)萘啶酮酸钠盐溶液萘啶酮酸20mg、0.05mol/L氢氧化钠溶液10mL， 振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。

(8)0.05mol/L氢氧化钠溶液 氢氧化钠0.1g、灭菌蒸馏水50mL，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。

(9)柠檬酸铁铵溶液柠檬酸铁铵0.5g、灭菌蒸馏水10mL，振摇混匀，充分溶解后过滤除菌。

(10)Fraser增菌液酪蛋白酶消化物5.0g、动物组织酶消化物5.0g、牛肉浸膏5.0g、酵母浸膏5.0g、氯化钠20.0g、磷酸氢二钠12.0g、磷酸氢二钾1.35g、七叶苷磷酸氢二钠1.0g、氯化锂磷酸氢二钠3.0g、蒸馏水1000mL。将上述成分置于50℃水浴中充分溶解，冷却后调pH至7.0~7.4，分装，121℃高压灭菌15min。

(11)FtaserI增菌液在1000mLFraser增菌液中加入盐酸吖啶黄溶液5mL、萘啶酮酸钠盐溶液5mL、柠檬酸铁铵溶液10mL。

(12)FrascrⅡ增菌液在1000mLFraser增菌液中加入盐酸吖啶黄溶液10mL、萘啶酮酸钠盐溶液10mL、无菌分装于10mL大试管中。

(13)沙门菌酶联免疫试剂盒。

(14)肠出血性大肠埃希菌0157酶联免疫试剂盒。

(15)单核细胞增生李斯特菌酶联免疫试剂盒。

[沙门菌的检验]

(1)前增菌和增菌按GB/T4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的规定处理。

(2)增菌后处理移取1mL增菌液到灭菌小试管中，丁沸水中加热15min。剩余的增菌液于4℃保存，以便用于阳性确认。

(3)取沙门菌的酶联免疫试剂盒，于15~30℃的环境中放置30min。

(4)取适量加热处理后的增菌液到试剂盒测试孔中，通过自动或手动操作，经过酶联免疫反应过程后，检测反应强度(荧光强度或吸光度)，与参照值比较，得出检验结果。(注：详细操作需根据所用仪器及试剂盒的说明进行)

[肠出血性大肠埃希菌0157的检验]

(1)增菌无菌操作取25g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入225mLm EC+n，充分均质，于(41±1)℃培养(24±1)h。

(2)增菌后处理同沙门菌检验的增菌后处理。

(3)取肠出血性大肠埃希菌0157的酶联免疫试剂盒，于15~30℃的环境中放置30min。

(4)检验步骤：同沙门菌的检验。

[单核细胞增生李斯特菌的检验]

(1)前增菌无菌操作取25g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入225mL FraserⅠ增菌液，充分均质，于(30±1)℃培养(24±1)h。

(2)增菌吸取1mL FraserⅠ增菌液到9mLFraserⅡ增菌液中，于(30±1)℃培养(24±1)h。

(3)增菌后处理同沙门菌检验的增菌后处理。

(4)取单核细胞增生李斯特菌的酶联免疫试剂盒，于15 ~30℃的环境中放 置 30min。

(5)检验步骤:同沙门菌的检验。

［试剂盒控制］

(1)选用新批号试剂盒时,应验证试剂盒的质量指标;使用时应严格按照试剂 盒的要求设立试验对照。

(2)选用试剂盒检验不同目标期间,应不定期选用相应的可溯源标准菌株进 行过程控制。

［结果报告］

检验结果为阴性时,报告为未检出。检验结果为阳性时,应按GB/T4789.4-2010.GB/T 4789. 6—2003(食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》、 GB/T 4789. 30—2010《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准 单核细胞增生 李斯特氏菌检验》或其他标准进行确证。

文章来源：《食品快速检测实训教程》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。