对添加标样的缓冲溶液进行萃取，结果发现回收率只有56.8％。为了找出回收率偏低的原因，我们在样品中加入了3H-吗啡作为示踪标记物，然后在Varian方法中的目标物洗脱步骤之后又增加了以下四步洗脱：

2 mL 2％(体积分数)氨水一二氯甲烷／异丙醇(80：20，体积比)，流速约0.5 mL／min。

2 mL 2％(体积分数)氨水一二氯甲烷／异丙醇(80：20，体积比)，流速约0.5 mL／min。

2 mL 2％(体积分数)氨水一甲醇，流速约0．5 mL／min。

2 mL 2％(体积分数)氨水一甲醇，流速约0．5 mL／min。

收集上述每一步流过SPE柱的组分，用液体闪烁计数仪检测这些组分中的放射性强度(dpm)并计算回收率。该萃取方法至少存在两个问题需要优化。首先，在样品过柱过程有7．4％的3H-吗啡没有被萃取柱保留。这说明样品过柱的条件不是最适合的。由于吗啡是两性化合物，pH对其状态影响很大，所以应该从pH人手解决在样品添加步骤中吗啡流失的问题。柱洗涤步骤损失的目标物为1.6％，这个损失并不严重，可以接受。在洗脱过程中，用2 mL 2％氨水一二氯甲烷／异丙醇对萃取柱洗脱三次的回收率为71.2 9／5(E1+E2+E3)。在此之后用2％氨水一甲醇洗脱，依然得到10％的回收率(E4+E5)。说明2％氨水一二氯甲烷／异丙醇对吗啡的洗脱强度不够，应该选用洗脱强度更大的溶剂。根据上述判断，我们测试了不同pH对样品添加步骤的影响，并改用洗脱强度较大的2％氨水一甲醇作为洗脱溶剂。

将样品及萃取柱预处理溶液的pH调节至pH 3.3时，样品添加过程中3H-吗啡的损失从7．4％降至3％左右。而在pH 3.3的环境下对SPE柱进行洗涤，3H-吗啡的损失可以忽略不计。将洗涤溶液改为2％(体积分数)氨水一甲醇后，2 mL的洗脱溶液的洗脱回收率大于90％。根据上述实验结果，我们得出优化后的萃取方法如下：

样品预处理：取血样1 mL超声波振荡15 min后加入6 mL 0.1 mol／L磷酸缓冲液(pH 3.3)，涡旋振荡30 s。然后于1500 r／min离心15 min。取上清液供检。

柱预处理：2 mL甲醇，2 mL缓冲溶液(pH 3.3)。

样品添加：将处理好的血样过柱(Bond Elut Certify，3 mL／200 mg)，流速约1.5 mL／min。

柱洗涤：2 mL去离子水，l mL磷酸缓冲溶液(pH 3.3，0.1 mol／L)，2mL甲醇。

柱干燥：真空干燥2 min。

目标物洗脱：2 mL 2％(体积分数)氨水一甲醇，流速约0.5 mL／min。

通过对血样中的3H-吗啡进行萃取，并测定固相萃取过程中每一步的过柱组分，我们能够很明确地知道目标化合物在萃取过程中的哪一个步骤损失了，并针对性地对原有的方法进行优化。由于无需对收集的组分进行任何特别的萃取，直接用液体闪烁计数仪检测所收集的固相萃取过程中的每一个组分的放射性强度，整个查找问题的过程十分简便、快速。由此可见，对于有条件的实验室，使用放射性标记物查找回收率偏低的原因，优化固相萃取参数是一个有效的方法。