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提取与澄清——单糖与低聚糖的测定

发布时间:2015-05-20 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2449

由于食品体系复杂,一般通过选择适当的溶剂提取样品中的可溶性糖,并对其提取液进行纯化和排除干扰物质后,再进行侧定。

糖类的提取步骤一般包括:先将样品磨碎,再用石油醚提取除去其中的脂类和叶绿素,除去易被水提取的干扰物质,选择水或者其他极性溶剂作为提取剂,得到待测定的糖类样品。

一、常用提取剂

水为最常用提取剂。提取时控制温度在40一50℃,温度过高时,会提取出过多的淀粉和糊精,影响测定结果。另外,还可能提取出所有的氨基酸、色素等,导致测定结果偏高。为了防止糖类被酶水解,常常加入HgCl2来抑制酶的活性。

糖类在乙醇溶液中也具有一定的溶解度,故可用乙醇水溶液作为提取剂,其优点是能抑制酶的活性。乙醇浓度一般选择70%一75%,该浓度下可以排除蛋白质,即蛋白质完全沉淀析出,多糖类也不溶解于该混合提取剂中。

二、提取液的澄清

为了消除影响糖类测定的干扰物质,如果胶、蛋白质等物质,常常采用澄清剂沉淀影响糖类测定的干扰物质。

澄清剂必须符合以下条件:①能完全除去干扰物质;②不会吸附或沉淀糖类;③不会改变糖类的比旋光度等理化性质。过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作或易于去除。

常见的澄清剂有:

(1)中性醋酸铅Pb(Ac)2.3H2O。中性醋酸铅可除去蛋白质、单宁、有机酸、果胶等,还会聚集其他胶体,适用范围广。其特点为作用较可靠,不会使还原糖从溶液中沉淀出来,在室温下也不会生成可溶性的铅糖。缺点是脱色能力差,不能用于深色溶液的澄清。可应用于植物性样品,浅色的糖和糖浆样品、果蔬制品、焙烤制品。

(2)碱性醋酸铅。它能除去蛋白质、色素、有机酸,又能凝聚胶体。但是生成的沉淀体积大,可带走还原糖(如果糖)。过量的碱性乙酸铅因其碱度及铅糖的生成而改变糖类的旋光度,故只能用于处理深色的蔗糖溶液。

(3)乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液。利用乙酸锌与亚铁氰化钾生成的亚铁氰酸锌沉淀来吸附干扰物质,发生共同沉淀作用。这种澄清剂澄清效果良好,除蛋白质能力强。故适用于色泽较浅,富含蛋白质样液的澄清,如乳制品、豆制品等。

(4)硫酸铜(CuSO4)。10mLCuSO4溶液(69.28gCuSO4·5H2O溶于1L水中)与4mL1mol/LNaOH组成的混合液进行澄清,在碱性条件下,Cu2+可使蛋白质沉淀。适于富含蛋白质的样品的澄清,如牛乳。

(5)氢氧化铝[Al(OH)3]。氢氧化铝能凝聚胶体,但对非胶态杂质的澄清效果不好,适用于浅色糖溶液的澄清或作为附加澄清剂。

(6)活性炭。活性炭能除去植物样品中的色素,但是吸附能力强,能吸附糖类而造成损失。

澄清剂的种类很多,性能也各不相同,应根据样品溶液的种类、干扰物质的种类及含量予以适当的选择,同时还必须考虑所采用的分析方法,如用直接滴定法测定还原糖时不能硫酸铜一氢氧化钠溶液澄清样品,以免样品溶液中带入Cu2+;用高锰酸钾滴定法测定还原糖时,不能用乙酸锌一亚铁氰化钾溶液澄清样品溶液,以免样品溶液中引入Fe2+。

澄清剂用量太少达不到澄清的目的,但是使用过量会使分析结果产生误差。

采用乙酸铅作澄清剂时,澄清后的样品溶液中残留有铅离子,在测定过程中加热样品溶液时,铅能与还原糖(特别是果糖)结合生成铅糖化合物,使测定得到的还原糖含量降低。因此,经铅盐澄清的样品溶液必须除铅。

常用的除铅剂有草酸钠、草酸钾、硫酸钠、磷酸氢二钠等。使用时可以用固态加入(如固体草酸钠),也可以液态加入(如10%Na2SO4或10%Na2HPO4)。除铅剂的用量也要适当,在保证使铅完全沉淀的前提下,尽量少用。

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