北京普天同创生物科技有限公司
7.2 试样溶液的制备
称取待测样品5g(精确到0.01g)于50 mL带塞离心管中,按7.1.2和7.1.3操作。
7.3 空白基质溶液的制备
称取阴性样品5g(精确到0.01g)子50 mL带塞离心管中,按7.1.2和7.1.3操作。
7.4 液相色谱法测定
7.4.1 液相色谱条件
a)色谱柱:Diamonsil C18,5 um,150 mm×4.6 mm(内径)或相当者;
b)流动相:0.1%乙酸水溶液-乙腈-甲醇(50+20+30) ;
c)流速:1.0 mL/min;
d)检测波长:345 nm;
e)柱温:40℃;
f)进样量:50 uL。
7.4.2 色谱测定
在仪器最佳工作条件下,对基质混合标准校准溶液进样,以峰面积为纵坐标,基质混合校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,β-群勃龙、a-群勃龙的保留时间分别约为11.2 min和13.4 min。
7.5 液相色谱-串联质谱法测定
7.5.1 液相色谱条件
a)色谱柱:Inertsil C18, 5 um, 150 mm×2.1 mm(内径)或相当者;
b)流动相:0.1%乙酸水溶液+乙腈(62+38);
c)流速:0.3 mL/min;
d)色谱柱温度:35℃;
e)进样量:20 uL。
7.5.2 质谱条件
a)离子源ESI,正模式;
b)雾化喷嘴压力:0.24 MPa;
c)干燥气流量:9.0 L/min;
d)干燥气温度:350℃;
e)毛细管电压、去集簇电压、碰撞电压等电压值应优化至最优灵敏度;
f)检测离子对见表1。
表1被测物的保留时间、母离子和子离子
7.5.3 定性测定
每种被测组分选择1个母离子,2个以上子离子,在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间,与基质混合标准校准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内;且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较,若偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差
7.5.4 定量测定
在仪器最佳工作条件下,对基质混合标准校准溶液进样,以峰面积为纵坐标,基质混合校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内:上述色谱和质谱条件下。
7.6 平行试验
按以上步骤,对同一试样进行平行试验测定。
7.7 回收率试验
吸取适量混合标准工作溶液,得到相应浓度的混合标准溶液。用空白基质溶液(7.3)稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液,按7.2操作,测定后计算样品添加的回收率。
8结果计算
试样中被测组分残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算:
式中:
x—试样中被测组分残留量,单位为微克每千克(ug/kg);
c—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V—样品溶液最终定容体积,单位为毫升(mL);
m—样品溶液所代表最终试样的质量,单位为克(g)。
9 精密度
本标准的精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的,重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。
9.1 重复性
在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r,被测物的含量范围及重复性方程见表3。
表3 两种群勃龙的含量范围及重复性和再现性方程
如果差值超过重复性限,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。
9.2 再现性
在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,被测物的含量范围及再现性方程见表3。
相关链接:牛肌肉、肝、肾中的a-群勃龙、β-群勃龙残留量的测定(一)
文章来源:《常用兽药残留量检测方法》
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