1 范围

本标准规定了猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆及其代谢物阿扎哌醇和β-阻断剂咔唑心安残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定。

本标准的方法检出限：猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、咔唑心安均为0.5 ug/kg，甲苯噻嗪为0.25 ug/kg，阿扎哌隆为0.2 ug/kg，阿扎哌醇为0.15 ug/kg,氟哌啶醇为0.1 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1：1994，IDT)

GB/T 6379.2测定方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004 ,ISO 5725-2;1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

试样中残留的六种镇定剂及其代谢产物在碱性条件下用特丁基甲醚提取，并通过向提取液中加入磷酸盐缓冲液(pH=3)，使镇定剂被提取到缓冲溶液中，并用特丁基甲醚净化缓冲溶液，改变缓冲溶液为碱性，将镇定剂反提取到特丁基甲醚中，浓缩，定容。供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 无水乙醇：色谱纯。

4.4 盐酸：优级纯。

4.5 特丁基甲醚。

4.6 氢氧化钠。

4.7 氢氧化钠溶液：5 mol/L。称取50.0g氢氧化钠(4.6)用水溶解，定容到250 mL。

4.8 磷酸二氢钾。

4.9 磷酸二氢钾溶液：1mol/L,PH=3，称取68.045g磷酸二氢钾(4.8)用水溶解，用盐酸(4.4)将溶液的pH值调至3.0，定容到500 mL。

4.10 甲酸铵。

4.11 甲酸：色谱纯。

4.12 甲酸铵缓冲液：0.1 mol/L,PH=4，称取6.306 g甲酸铵(4.10)用水溶解，用甲酸(4.11)将pH值调到4.0，定容至1000 mL。

4.13 甲酸铵缓冲液;0.01 mol/L, pH=4，取甲酸铵缓冲液(4.12)100 mL用水稀释定容到1000 mL。

4.14 流动相A: 0.01 mol/L甲酸铵缓冲液，pH=4(4.13)，通过0.2 um过滤器过滤。

4.15 流动相B：乙腈(4.1)通过0.2 um过滤器过滤。

4.16 流动相C：甲醇(4.2)通过0.2 um过滤器过滤。

4.17 混合流动相：将70 mL流动相A,15 mL流动相B以及15 mL流动相C混合。

4.18 六种镇定剂及其代谢物和昆阻断剂标准物质。

4.18.1 乙酰丙嗪，纯度≥99％。

4.18.2 阿扎哌隆，纯度：99％。

4.18.3 咔唑心安，纯度：99%。

4.18.4 氯丙嗪·盐酸，纯度：99%。

4.18.5 氟哌啶醇，纯度≥99％。

4.18.6 丙酰二甲氨基丙吩噻嗪。盐酸，纯度：98％。

4.18.7 甲苯噻嗪·盐酸，纯度：99％。

4.18.8 阿扎哌醇，浓度10.0 ug/mL(甲醇)。

4.19 六种镇定剂及其代谢物和份阻断剂标准储备溶液

4.19.1 乙酰丙嗪、阿扎哌隆、咔唑心安、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪标准储备溶液：0.10mg/mL。称取适量的上述标准物质(4.18.1～4.18.7)，分别用无水乙醇(4.3)，配成0.10 mg/mL的标准储备液。储备液避光在2℃～4℃条件下贮存。每年配制一次。

4.19.2 阿扎哌醇标准储备溶液：1.0 ug/mL。准确移取1.0 mL阿扎哌醇标准液(4.18.8)于10 mL容量瓶中，用无水乙醇(4.3)定容至刻度，混匀，配成1.0 ug/mL的标准储备液。储备液避光在2℃～4℃条件下贮存。每年配制一次。

4.20 六种镇定叙其代谢物和β-阻断剂混合标准储备溶液

吸取适量的标准储备溶液(4.19.1和4.19.2)，用乙腈配制成混合标准储备溶液。在2℃～4℃条件下贮存。

4.21 六种镇定剂及其代谢物和汗阻断剂混合标准工作溶液

根据每种镇定剂及其代谕物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度(ng/mL)的混合标准工作溶液。在2℃～4℃条件下避光贮存。

注：称取标准物的质量是按纯度和含盐量修正过的质量。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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