革兰氏染色法的步骤

草酸铵结晶紫染液配制

A液：结晶紫(crystal violet) 2g、95%酒精 20mL；

B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g、蒸馏水 80mL；

混合A、B两液，静置48h后使用。

卢戈氏(Lugol)碘液配制

碘片 1.0g、碘化钾 2.0g、蒸馏水 300mL；

先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。

番红复染液配制

番红(safranine O) 2.5g、95%酒精 100mL；

取上述配好的番红酒精溶液10mL与80mL蒸馏水混匀即成。

染色

将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗；

滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；

滴加95%酒精脱色，约30s；或将酒精滴满整个涂片，立即去除，再次滴加酒精，脱色10s；

水洗，滴加复染液，复染1min。水洗、待干、镜检。

结果

革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。