细胞悬液的制备

（1）用75%酒精棉球消毒超净工作台台面，然后用75%酒精棉球消毒双手及暴露部位；

（2）用75%酒精棉球消毒各培养用液的瓶盖以及培养瓶瓶盖部位，并在酒精灯外焰上方一过，拧开瓶盖，将瓶口再在酒精灯外焰上方一过后，拧上瓶盖，但不要拧紧，以便下步操作；

（3）轻轻将细胞培养瓶内旧培养液倒入烧杯中，注意不要让瓶口碰到烧杯，不要让液体溅出；

（4）吸取PE液3ml加入瓶内，加入时注意从侧面加入而不能直接冲细胞贴壁处，避免造成细胞脱壁，然后盖上盖子，平放轻摇40下，轻轻倒出，要求倒干净；

（5）加入0.3ml的0.25%胰蛋白酶液，加入时直冲细胞贴壁处，平放轻摇，使酶液漫过整个瓶底部，一分钟之内将培养瓶放在倒置显微镜台上进行观察，可发现细胞质渐渐回缩，细胞间隙增大，细胞慢慢变圆，用手掌拍打瓶底和瓶侧，使细胞从瓶壁上脱落下来并分散，呈悬浮状；

（6）立即加入5mlMEM+10%小牛血清，用吸管向瓶壁轻轻吹吸几次，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到，使细胞全部从瓶壁脱落并形成均匀的细胞悬液；