一、实验目的

    掌握原子荧光光度法测定粮食中硒含量的原理和方法。

    二、实验原理

    粮食样品加酸消化后，在HCl溶液中，六价硒(Se)还原成四价硒(Se)，以NaBH₄作为还原剂，在酸性介质中，四价硒进一步还原成硒化氢(SeH₂)气体，由载气带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子激发至高能态，当去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其强度与硒含量成正比。通过测定荧光强度，并与标准物质进行比较，就可以测定出样品中硒的含量。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材

    原子荧光光度计、干燥箱、消化瓶(高型烧杯)、电炉、不锈钢磨等。

    2．试剂

    除特别注明外，实验所用试剂均为分析纯，水为去离子水。

    (1)常规试剂：HN0₃(优级纯)、HClO₄(优级纯)、HCl(优级纯)、NaOH(优级纯)、

K₃Fe(CN)₆、NaBH₄、Se(光谱纯)。

    (2)常规溶液：HN0₃—HClO₄；混合酸(4+1，体积比)、HCl溶液(6mol／L)、NaOH溶液(5g／L)、铁氰化钾[K₃Fe(CN)₆]溶液(100g／L)、NaBH₄溶液(8g／L，以NaOH溶液溶解后，加水定容)。

    (3)硒标准储备液(100／μg／mL)：称取100．Omg硒(光谱纯)，溶于少量HN0₃中，加2mL HClO₄，置沸水浴中加热3～4h，冷却后，加8．4mL HCl，再置沸水浴中煮2min，准确稀释

至1000mL。

    (4)硒标准使用液(1μg／mL)：吸取1．OmL硒标准储备液，加水定容至100mL。

    3．实验材料

    2～3种稻谷、小麦、玉米，各250g。

    四、实验步骤

    1．样品消化

    (1)将样品用水洗三次，于60℃烘干，用不锈钢磨粉碎，过60目筛，储于塑料瓶内，备用。

    (2)称取2．0g样品于150mL消化瓶内，加10．0mL HN0₃—HClO₄混合酸及几粒玻璃珠，盖

上表面皿，静置过夜。

    (3)于电炉上加热消化，并及时补加混合酸，使样品消化彻底至溶液为清亮无色并伴有白烟。继续加热至溶液体积为2mL左右，但不可蒸干，冷却。

    (4)加5mL HCl溶液，继续加热至溶液清亮无色并伴有白烟出现，以将六价硒完全还原成四价硒，冷却，转移定容至5dmL容量瓶中。

    (5)取与样品处理相同体积的混合酸和HCl，按相同操作做试剂空白试验。

    2．测定

    (1)分别取10mL样品消化液和试剂空白液于15mL离心管中，同时分别取O、O.1mL、O.2mL、0.3mL、O.4mL、O.5mL硒标准使用液(相当于0、0.1μg、O.2μg、O.3μg、O.4μg、0.5μg硒)于15mL离心管中，补水至10mL。

    (2)在各离心管中，分别加入2mL HCl、1mL K₃Fe(CN)₆溶液，混匀。

    (3)连续用标准系列的“O”管进样于原子荧光分光光度计，待读数稳定之后，转入标准系列测量，绘制标准曲线。然后转入样品测量，分别测定样品空白和样品消化液。

    (4)根据标准曲线，计算出试剂空白和样品消化液(10mI．)中硒的含量。

    (5)参考测定条件：负高压为340V；灯电流为100mA；原子化温度为800℃；炉高为8mm；

载气流速为500mL／min；屏蔽气流速为1000mL／min；测量方式为标准曲线法；读数方式为峰面积；延迟时间为1 s；读数时间为15s；加液时间为8s；进样体积为2mL。

    3．计算

    按下式计算样品中硒的含量：

        m₁—m₀    

    x=─────×5

          m

    式中，x为样品中硒的含量，mg／kg；m₁为样品消化液中硒的质量，μg；m₀为试剂空白消

化液中硒的质量，μg；m为样品的质量，g。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的测定条件仅供参考，在实际测定中，应根据原子荧光光度计的型号和使用说明书选择适合的测定参数。

    2．在测定不同样品时，进样前一定要注意清洗进样器，以避免不同样品之间相互污染。

    3．NaBH。浓度的选择：在酸性介质中，试样溶液中的硒与NaBH₄反应生成SeH₂。如果NaBH₄浓度过低，则不利于硒转化为气态氢化物；反之，NaBH₄浓度过高，则产生大量H₂ ，稀释氢化物浓度。所以，在实际过程中，可以依据样品中硒的含量适当调整NaBH₄的浓度。

    六、思考题

    1．叙述你在试验中所使用的原子荧光光度计的型号、各部件的名称及其功能。

    2．叙述在样品消化液中加入K₃Fe(CN)₆溶液的作用。