6 病理学检查

6.1 生殖毒性病理学检查

6.1.1 大体解剖

生殖发育毒性试验过程中，处死的或死亡的所有成、仔鼠均需进行大体病理解剖，观察包括生殖器官在内的脏器是否存在病变或结构异常。

6.1.2 器官称量

在大体解剖的基础上应对子宫及卵巢、睾丸及附睾、前列腺、精囊腺、脑、肝脏、肾、脾、脑垂体、甲状腺和肾上腺等重要的器官进行称量,并记录。

6.1.3 组织病理学检查

用于交配和发育毒性检测的F₀和F₁代动物，保留其卵巢、子宫、子宫颈、阴道、睾丸、副睾、精囊腺、前列腺、阴茎以及可能的靶器官进行组织病理学检查。雄鼠还应判断精子的数量是否改变，是否出现精子畸形。大体解剖中显示病变的组织应做组织病理学检查,建议对怀疑不育的动物的生殖器官做组织病理学检查。

此外可先对最高剂量受试物组和对照组的动物标本以及剖检中发现有异常的标本进行组织病理学检查。如最高剂量受试物组没有发现有意义的病理改变,其他剂量受试物组的标本可不必再进行病理检查。反之,若最高剂量受试物组发现有意义的病理改变,则其他剂量受试物组相关的标本也应做进一步的检查。

6.2 神经发育毒性病理学检查

于F₂代仔鼠出生后第11天和第70天,分别进行相关仔鼠的神经病理学检査。可先进行高剂量受试物组和对照组的检查,如发现有意义的神经病理改变，再继续进行中、低剂量受试物组的检查。神经发育毒性病理检査建议观察嗅球、大脑皮层、海马、基底神经节、丘脑、下丘脑、中脑、脑干以及小脑等组织。

7 数据处理和结果评价

7.1 数据处理

将所有的数据和结果以表格形式进行总结,数据可以用表格进行统计,表中应显示每组的实验动物数、交配的雄性动物数、受孕的雌性动物数、各种毒性反应及其出现动物百分数。生殖、生理发育指标数据,应以窝为单位统计。神经发育毒性以及病理检查等结果应以适当的方法进行统计学分析。计量资料采用方差分析,进行多个试验组与对照组之间均数比较,分类资料采用FiSher精确分布检验、卡方检验、秩和检验,等级资料采用Ridit分析、秩和检验等。

7.2 结果评价

逐一比较受试物组动物与对照组动物观察指标和病理学检査结果是否有显著性差异，以评定受试物有无生殖发育毒性,并确定其生殖发育毒性的最小观察到有害作用剂量(LOAEL)和未观察到有害作用剂量(NOAEL)。同时还可根据出现统计学差异的指标(如体重、生理指标、大体解剖和病理组织学检查结果等)，进一步估计生殖发育毒性的作用特点。

8 试验报告

8.1 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。

8.2 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。

8.3 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。

8.4 试验摘要。

8.5 受试物:名称、批号、剂型、状态(包括感官、性状、包装完整性、标识)、数量、前处理方法、溶媒。

8.6 实验动物：物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源(供应商名称、实验动物生产许可证号)，动物检疫、适应情况,饲养环境(温度、相对湿度、实验动物设施使用许可证号)，饲料来源(供应商名称、实验动物饲料生产许可证号)。

8.7 试验方法:试验分组、每组动物数、剂量选择依据、受试物给予途径及期限、观察指标、统计学方法。

8.8试验结果：

a)按性别和受试物组分别记录的毒性反应,包括生殖、妊娠和发育能力的异常；

b)试验期间动物死亡的时间或实验动物是否生存到试验结束；

c)每窝仔鼠的体重和仔鼠的平均体重，以及试验后期单只仔鼠的体重；

d)任何有关生殖,仔鼠及其生长发育的毒性和其他健康损害效应；

e)观察到的各种异常症状的出现时间和持续过程；

f)亲代(F₀)和选作交配的子代动物的体重数据；

g)F₂代仔鼠生理发育指标达标的时间；

h)F₂代仔鼠个体神经行为发育指标检查结果；

i)F₂代仔鼠学习和记忆功能指标的测试结果；

j)病理大体解剖的发现；

k)病理组织学检查结果的详细描述；

l)结果的统计处理。

8.9 试验结论:受试物生殖发育毒性作用的特点,剂量-反应关系。并得出对各代经口生殖发育毒性的NOAEL和(或)LOAEL结论等。

9 试验的解释

生殖毒性试验检验动物经口重复暴露于受试物产生的对F₀和F₁代雄性和雌性生殖功能的损害及对F2代的功能发育的影响，并从剂量-效应和剂量-反应关系的资料，得出生殖发育毒性作用的LOAEL和NOAEL。试验结果应该结合亚慢性试验、致畸试验、生殖毒性试验、毒物动力学及其他试验结果综合解释。由于动物和人存在物种差异,故试验结果外推到人存在一定的局限性,但也能为初步确定人群的允许接触水平提供有价值的信息。

相关链接：生殖发育毒性试验（三）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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