二、HPLC/MS/MS联用测定法

HPLC柱后衍生荧光检测法是黄曲霉毒素测定中的常用方法，虽然该法前处理采用了免疫亲和柱，但由于中药中存在较多与黄曲霉毒素结构类似的香豆素类化合物，因此在某些药材的检测过程中可能出现假阳性干扰。采用HPLC/MS/MS检测方式，通过色谱保留时间和质谱特征碎片两种模式，可以较为有效地排除假阳性干扰。同时，HPLC/MS/MS检测还具有灵敏度更高、检测速度快等优势，可作为黄曲霉毒素检测中的验证方法。

(一) 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10mmol/L醋酸铵溶液为流动相A，以甲醇为流动相B；柱温25℃；流速为每分钟0.3ml；按表13-4中的规定进行梯度洗脱。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

表13-4 HPLC梯度洗脱程序

以三重四极杆串联质谱仪检测。电喷雾离子源(ESI)，采集模式为正离子模式；各化合物监测离子对和碰撞电压(CE)见表13-5。

表13-5 检测离子对和碰撞电压(CE)相关参数

(二) 操作方法

1. 系列对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)适量，用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04～3ng/ml，含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12～10ng/ml的系列对照品溶液，即得(必要时可根据样品实际情况，制备系列基质对照品溶液)。

2. 供试品溶液的制备同光化学衍生法。

3. 测定法精密吸取上述系列对照品溶液各5ul，注入液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5ul，注入液相色谱-质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的浓度，计算，即得。

(三) 注意事项

1. 实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。

2. 残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器(装有10%次氯酸钠溶液)内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

(四) 典型色谱图

图13-13 黄曲霉毒素混合对照品HPLC/MS/MSTIC图谱

图13-14 柏子仁HPLC/MS/MSTIC图谱

图13-15 槟榔 HPLC/MS/MS TlC图谱

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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