三、氮测定法

(一) 简述

氮测定法为测定含氮有机物中含氮元素量的分析方法。本法的原理是供试品在硫酸及硫酸钾、无水硫酸铜等催化剂的作用下，经加热分解使转化为硫酸铵，再经碱化使氨馏出，用硼酸溶液收集，再用硫酸滴定液滴定，计算氮含量。测定步骤包括消化、蒸馏和滴定三步。根据测定范围的高低分为常量法(约相当于含氮量25～30mg)、半微量法(约相当于含氮量1.0～2.0mg)，以及定氮仪法(常量及半微量)，应按品种标准中规定的方法选用。

(二) 仪器

1. 常量法仪器由500ml凯氏烧瓶、氮气球和冷凝管组成。

2. 半微量法仪器由1000ml圆底烧瓶、连接氮气球的蒸馏器和直形冷凝管等组成。

3. 定氮仪法仪器半自动定氮仪由消化仪和自动蒸馏仪组成；全自动定氮仪由消化仪、自动蒸馏仪和滴定仪组成。

(三) 试药

1. 硫酸钾(或无水硫酸钠)、硫酸铜、硫酸、氢氧化钠、硼酸等均为分析纯。

2. 硫酸滴定液(0.05mol/L)。

3. 甲基红-溴甲酚绿指示液。

(四) 操作法

1. 第一法(常量法)

(1) 称样：取供试品适量(约相当于含氮量25～30mg)，精密称定，置干燥的500ml凯氏烧瓶中。供试品如为固体或半固体，可用定量滤纸包裹称取，也可直接称入。

(2) 消化：在凯氏烧瓶中依次加入硫酸钾(或无水硫酸钠)10g和硫酸铜0.5g，再沿瓶壁缓缓加硫酸20ml；加玻璃珠或沸石2～3粒，在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使烧瓶成45°斜置，用直火缓缓加热(加热部位保持在液面以下)，使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，强热至沸腾，至溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热30分钟，放冷。沿瓶壁缓缓加水250ml，摇匀，放冷。

(3) 蒸馏：沿瓶壁加40%氢氧化钠溶液75ml，使流至瓶底自成一液层，加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接；另取2%硼酸溶液50ml，置500ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿指示液10滴；将冷凝管的下端浸入硼酸溶液的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，蒸至接收液的总体积约为250ml时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

(4) 滴定：馏出液用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫酸滴定液(0.05m0l/L)相当于1.401mg的N。

2. 第二法(半微量法)

(1) 蒸馏装置(图14-2)：图中A为1000ml圆底烧瓶，B为安全瓶，C为连有氮气球的蒸馏器，D为漏斗，E为直形冷凝管，F为100ml锥形瓶，G、H为橡皮管夹。

图14-2蒸馏装置

连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃珠或沸石数粒，从D漏斗加水约50ml，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A瓶中的水，当蒸气从冷凝管尖端冷凝而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的水反抽到B瓶，开G夹，放出B瓶中的水，关B瓶及G夹，将冷凝管尖端插入约50ml水中，使水自冷凝管尖端反抽至C瓶，再抽至B瓶，如上法放去。如此将仪器洗涤2～3次。

(2) 称样：取供试品适量(约相当于含氮量1.0～2.0mg)，精密称定，置干燥的30～50ml凯氏烧瓶中。

(3) 消化：在烧瓶中加硫酸钾(或无水硫酸钠)0.3g与30%硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml；在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大火力，沸腾至溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热10min，放冷，加水2ml。

(4) 蒸馏：取2%硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端插入液面下。然后，将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转入C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗漏斗数次，关G夹，加热A瓶进行蒸馏，至硼酸液由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

(5) 滴定：馏出液用硫酸滴定液(0.005mol/L)滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验(空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同，约70～75ml)校正。每1ml的硫酸滴定液(0.005mol/L)相当于0.1401mg的N。

3. 第三法(定氮仪法)

(1) 称样：根据供试品的含氮量，参考常量法或半微量法称取样品置消化管中。

(2) 消化：依次加入适量硫酸钾、硫酸铜和硫酸，把消化管放入消化仪中，按照仪器说明书的方法开始消解[一般150℃，5分钟(去除水分)；350℃，5分钟(接近硫酸沸点)；400℃，60～80分钟]至溶液成澄明的绿色，再继续消化10分钟，取出，冷却。

(3) 蒸馏和滴定：将配制好的碱液、吸收液和适宜的滴定液分别置于自动蒸馏仪相应的瓶中，按照仪器说明书的要求将已冷却的消化管装入正确位置，关上安全门，连接水源，设定好加入试剂的量、时间、清洗条件及仪器参数等，开启全自动蒸馏仪开始自动蒸馏和滴定。半自动的取馏出液照第一法或第二法滴定测定氮的含量。

(五)注意事项

1. 蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟以上。

2. 取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40%氢氧化钠溶液的用量。

3. 消化液应放冷后再沿瓶壁缓缓加水，防止局部过热暴沸，冲出瓶外。

4. 约80%以上的氨在最初1～2分钟蒸馏出，初蒸速度不宜太快，以免氨蒸出后不能及时被吸收而逸失。

5. 蒸馏出的氨接收液应尽快滴定，避免放置时间过长，影响测定结果。

(六) 记录

记录供试品的称样量、滴定液的消耗体积。

(七) 计算公式：

式中，T为滴定度(mg/ml)；Vs为供试品消耗的滴定液体积(ml)；V0为空白消耗的滴定液体积(ml)；F为滴定液的校正因子；W为供试品的重量；供试品平行测定2份，常量法的相对偏差一般不得过0.5%；半微量法的相对偏差不得过1.0%；空白2份，极差不得大于0.05ml。

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。