11.2.2.1 适用范围

本方法适用于蜂蜜中十四种喹诺酮(依诺沙星、诺氟沙星、麻保沙星、氟罗沙星、环丙沙星、氧氟沙星、达氟沙星、恩诺沙星、奥比沙星、沙拉沙星、司帕沙星、二氟沙星、噁喹酸、氟甲喹)残留量液相色谱-串联质谱测定。十四种喹诺酮方法检出限均为2ug/kg。

11.2.2.2 方法原理

蜂蜜中喹诺酮类药物残留用磷酸盐缓冲溶液(pH=3)提取，过滤后，经Oasis HLB或相当的固相萃取柱净化，用氢氧化铵甲醇溶液洗脱并蒸干，残渣用定容液溶解，过0.2um滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

11.2.2.3 试剂和材料

乙腈、甲醇(HPLC级，迪马公司)，磷酸、乙酸、氢氧化铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾(优级纯，天津化学试剂二厂)，依诺沙星、诺氟沙星、麻保沙星、氟罗沙星、环丙沙星、氧氟沙星、达氟沙星、恩诺沙星、奥比沙星、沙拉沙星、司帕沙星、二氟沙星、嗯喹酸、氟甲喹标准品(德国sigma-aldrich公司)，Oasis HLB固相萃取柱(500mg/6mL，美国Waters公司)，水为高纯水。磷酸盐缓冲溶液：0.05mol/L。称取5.68g磷酸氢二钠和1.36g磷酸二氢钾，放入1000mL烧杯中，加入800mL水溶解，用磷酸调至pH=3.0，再用水定容至1000mL。氢氧化铵甲醇溶液：(1+19，v/v)。吸取10mL氢氧化铵与190mL甲醇混合。定容液：乙腈+0.01mol/L乙酸溶液(1+4，v/v)。量取100mL乙腈与400mL 0.01mol/L乙酸溶液混合。

喹诺酮标准储备溶液：1mg/mL。准确称取适量的每种喹诺酮标准物质，用氢氧化铵甲醇溶液配成1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存可使用6个月。中间浓度喹诺酮混合标准储备溶液：10mg/L。分别吸取0.1mL标准储备溶液放入10mL容量瓶中，用定容液定容至刻度。喹诺酮基质混合标准工作溶液：吸取不同体积中间浓度混合标准储备溶液，用空白样品提取液配成5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL不同浓度的基质混合标准工作溶液。当天配制。

11.2.2.4 仪器和设备

API 3000液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源(美国AB公司)，1100液相色谱仪(美国Agilent公司)，TurboVapLV氮气浓缩仪(美国Caliper公司)，550ApH计(美国ThermoOrion公司)，MilliQ去离子水发生器(美国Millipore公司)，VORTEX-2涡旋混合器(美国ScientificIndustries公司)。

11.2.2.5 样品前处理

(1)提取

称取5g试样(精确至0.01g)，置于150mL三角瓶中，加入30mL 0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=3)，于液体混匀器上快速混匀1min，使试样完全溶解。

(2)净化

将塞有玻璃棉的玻璃贮液器连到OasisHLB固相萃取柱上，把样液倒入玻璃贮液器中，调节流速≤3mL/min使样液通过OasisHLB固相萃取柱，待样液完全流出后，分别用5mL水和5mL甲醇+水(3+7)洗柱，弃去全部流出液。固相萃取柱在65kPa负压下，减压抽干30min，然后用5mL氢氧化铵甲醇溶液(1+19)洗脱，收集洗脱液于10mL锥形试管中。在50℃用氮气浓缩仪吹干。准确加入1.0mL定容液溶解残渣，过0.2um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

按上述提取净化操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的样品空白提取液。

相关链接：鳗鱼及制品中15种喹诺酮类药物残留量测定方法的重复性和再现性

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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