(1)水解方法

吡唑酮类药物不与组织形成共价键结合，无需酶解或水解。但安替比林的中间代谢物(NORA、OHA、HMA和CBA)由于所含氨基、羧基和羟基与组织蛋白结合，需要酶解后提取。

Inaba等测定人尿液中安替比林及其代谢物，尿液加入0.5mL柠檬酸盐缓冲液调节至中性，加入0.1mL β-葡萄糖醛酸酶( 14500U)和硫酸酯酶(4800U)，在37℃孵育1h或2h酶解，然后用有机溶剂提取。酶解过程中加入β-葡萄糖醛酸酶抑制剂—D-葡萄糖二酸1，4-内酯，则可提取的NORA和OHA大幅减少，表明尿液中NORA和OHA主要与葡萄糖醛酸结合形式存在。对实际样本进行了测定，气相色谱法(GC)测定NORA的变异系数(CV)小于3.1%，HMA的CV为8.9%；尿液中NORA的检测限(LOD)为1 pg/mL，OHA为10 pg/mL；回收率未予报道。Mikati等测定尿液中安替比林及其代谢物，以氨基安替比林做内标，取1 mL尿液调节pH4.8～5.0，加入0.05mL β-葡萄糖醛酸酶，37℃孵育3h酶解，经提取净化后用高效液相色谱(HPLC)测定。HMA、NORA、安替比林、AA和OHA的绝对回收率分别为20%、89%、66%、69%和87%；以AA为内标，HMA、NORA、安替比林和OHA的相对回收率范围为88%～127%，CV范围为1.2%～4.1%；定量限(LOQ)分别为8 μg/mL、10 μg/mL、3 μg/mL、10 μg/mL。

相关链接：吡唑酮类药代谢和毒理学

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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