3)气相色谱-质谱检测衍生化

①甲基化(图19-7)

图19-7 硫脲嘧啶类药物甲基化示意图

Yu等在阴离子交换树脂AGMP-1SPE柱上，用碘甲烷对硫脲嘧啶类药物进行甲基化(图19-7)。乙腈提取液用氮气吹至约2mL，加入0.1mol/L NaOH至10mL，过AG MP-1阴离子交换柱，用3mL水、3mL甲醇洗涤，抽干15min，加入0.3mL 0.5mol/L碘甲烷乙腈溶液，铝箔避光反应1h后，用1mL乙腈洗脱，再用GC-MS测定。同时，作者对乙腈和超临界CO2作为反应溶剂的效果进行了比较。在乙腈中，室温下1h，采用50mg树脂就可以很好地吸附和甲基化硫脲嘧啶类药物标准物质：在超临界CO₂中， 200bar压力下80℃ 20min可以获得与在乙腈中相似的衍生化效果。试验发现，随着吸附树脂量的增加，分析物的二甲基衍生物量减少，特别是在低浓度时分析物与树脂间存在少量的不可逆结合。加入适量的固定浓度的结构类似物“伴侣分子”一5-乙基-2-硫脲嘧啶，可以使标准品和样品的回收率保持稳定。当“伴侣分子”的量少于25ug时，二甲基衍生物量非常少：当“伴侣分子”的量逐步增加到200ug时，二甲基衍生物和结果重现性均逐步增强，但超过100ug后增加并不明显，因此实验采用100ug的5-乙基-2-硫脲嘧啶。

② 氟化硅烷化

Le Bizec等用10mL 0.1mmol/L NaOH提取甲状腺中的硫脲嘧啶类药物，提取液用冰醋酸调pH8后，加入250μL五氟溴化苄(PFBBr)与硫脲嘧啶类药物反应。超声波水浴混合5min后，40℃加热反应1h。碱性条件下，硫脲嘧啶类药物分子中的—SH和—OH均与PFBBr反应，生成di-PFB衍生物(图19-8)。

图19-8 硫脲嘧啶类药物氟化示意图

用冰醋酸调到酸性(pH3)后，-O-PFB衍生物被水解为—OH，而-S-PFB不变，生成mono-PFB衍生物。再加入25μL N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)，60℃加热反应30min，—OH与MSTFA反应，生成最终衍生物(图19-9)，用GC-MS检测。

图19-9 硫脲嘧啶类药物硅烷化示意图

Liu等也采用PFBBr和MSTFA进行衍生化。0.5mL 0.1mol/L NaOH乙醇溶液和25μL PFBBr加入到提取物中，涡旋混匀后于25℃水浴中反应10min。再用0.2mol/L HCI调pH3，用3×1.0mL二氯甲烷将衍生化产物萃取出来，氮气吹干后，再加入50μL二氯甲烷和50μL MSTFA，60℃反应30min，加入200μL正己烷后，GC-MS测定。作者发现，MBI与其他硫脲嘧啶类药物衍生化产物不一致。MBI没有—OH，但有NH，在碱性条件下与PFBBr反应也会生成MBI-di-PFB衍生物。但在酸性条件下，N-PFB衍生物不会被水解，因此最终反应生成的是MBI-di-PFB衍生物(图19-10)。

图19-10 MBI氟化示意图

相关链接：硫脲嘧啶类药物残留分析技术——荧光检测衍生化

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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