在GenBank中搜索炭疽杆菌的大分子毒素基因（PA）序列；对上述序列进行分析，选择合适的序列和合适的酶切位点，并将酶切位点加至序列两端；将处理后的序列进行全基因人工合成，并将所得全长基因克隆至质粒载体pUC19中，构建获得包含目的基因序列的质粒DNA标准物质。利用大肠杆菌DH5α进行复制生产，对目标质粒DNA进行提取纯化，经稀释分装得到质粒DNA样品。

本标准物质中质粒DNA采用紫外分光光度法和高分辨电感耦合等离子体质谱法（HR-ICP-MS）进行定值。定值过程使用满足计量学特性要求的测量方法和计量器具，保证其溯源性。

标准值的扩展不确定度主要由测量方法、定值以及均匀性、稳定性等不确定度合成。

参照JJF1343 国家计量技术规范（等效ISO指南35），对分装后的样品进行随机抽样，采用生化分析仪法对该标准物质进行均匀性检验和长期稳定性跟踪考察。结果表明：均匀性符合F检验规则，稳定性考察良好。 本标准物质量值自定值之日起，有效期12月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

包装：本标准物质采用冻存管包装,规格100μL携带或运输时应有防碎裂保护。 储存及使用:本标准物质需置于干燥、（-18±5）℃条件下保存。本标准物质每瓶100μL，用透明塑料离心管密封包装。使用前于室温平衡30min，标准物质打开后，请尽快放回-20℃保存，使用中严格防止沾污。最小取样量1μL，使用时应按二级以上生物安全标准防护。核酸分子含有嘌呤环和嘧啶环的共轭双键，其紫外可见吸收光谱在260 nm附近有一强的吸收峰，针对双链DNA，样品浓度和吸光值之间有以下关系：双链DNA样品浓度= OD260×核酸稀释倍数×50，其中OD260为核酸在260 nm处的吸光值。用TE缓冲液（成分是10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH=7.5）做空白对照，通过测定其在260 nm处的吸光值可换算出质粒浓度。核酸分子中，每个碱基对应一个磷原子，根据公式：含磷量P%=碱基数×磷的原子量÷DNA分子量，即可计算出四个质粒DNA标准物质的含磷量。再利用HR-ICP-MS方法检测标准物质样品中的磷元素含量，计算得到质粒DNA标准物质的含量，其拷贝数体积浓度可根据其分子量和阿伏加德罗常数计算得出其拷贝数浓度为copies/μL。