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PCR实验方法

发布时间:2015-09-18 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1462

常规实验器具与材料

移液器:1 ml 、200μl、20μl、10μl、2μl;吸头及吸头盒:lml、200μl、20μl;匀浆管:5m1、2ml、10ml; EP管:1.5rnl、0.2m1、100μl;试剂瓶:2个l00rn1的棕色试剂瓶(广口、带盖)、1个125rnl的白色试剂瓶(放无水乙醇);量筒:50ml、 250m1、500m1;容量瓶:250ml、500m1、1000m1;试管架:5rnl、1.5rnl、20μl;盐水瓶:250m1、500m1各2个备用(一个装无水乙醇,另一个装DEPC水);铝制饭盒:4-5个;大瓷缸:2个;锡箔纸:一卷;卷纸:2卷;三角烧瓶:带盖,稍大。

实验器具的处理与准备

塑料制品:包括枪头、EP管、匀浆管等。先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中枪头需要吸管吸进DEPC水后,打入盛DEPC水瓷缸中,过夜24h,然后捞出,尽量除去里面的水,放入吸头盒内高压灭菌,再烤干备用,实验前再高压灭菌一次(EP管)。

玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,包裹锡纸180℃烤6h后备用(洗净后先泡1‰DEPC水过夜,再烤干)。

匀浆器:包括剪刀、镊子等,先洗净后再高压,180℃烤6h(不需要泡DEPC水)。

试剂配制

DEPC水:吸出1ml放在999m1双蒸水中,配成1‰ DEPC水,放在1000m1容量瓶中,转子旋转4-6h后静置过夜备用。

75%乙醇:用无水乙醇+ DEPC水配制,然后放-20℃保存(其中DEPC水需先高压)。

异丙醇和氯仿:均应放入棕色瓶中。

电泳缓冲液:Tris, 54g;硼酸,27.5g; 0.5mol/L EDTA, 20m1、pH8. 0 ;蒸馏水定容至l000ml。

5×TBE(贮存液):将5×TBE稀释10倍成0. 5×TBE,就可以在电泳时使用(即工作液),如取50ml贮存液+450ml水→500m1工作缓冲液。

琼脂糖凝胶的配制(1. 0%) : 1.摊琼脂糖+l00m]电泳缓冲液,微波炉中加热30秒至沸腾,溶化的琼脂糖冷却至60℃时,加入l0mg/ml溴化乙啶2.5μl,充分混匀,将温热的凝胶倒入已置好梳子的胶模中,在室温下放置30-45 min后,进行电泳。

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