（一）配制培养基注意事项

为了分离和培养微生物，必须有适用于不同微生物的培养基。所有的培养基在配制时要注意以下几点：

①含有可被迅速利用的碳源、氮源、无机盐类以及其他成分。

②含有适量的水分。

③调至适合微生物生长的pH。

④具有合适的物理性能（透明度、固化性等）。

（二）配制方法配制一般培养基的主要程序可分为：调配、溶化、调整pH、澄清过滤、分装、灭菌、鉴定等步骤。

①调配：按培养基配方准确称取各成分，用少量水溶解。对于肉膏之类粘、胶状物，可盛在小烧杯或表面皿中称量，然后加水移入培养基中。此外，也可放在称量纸上称量后直接放入水中，这时如稍微加热，肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白陈等极易吸潮物质，在称取时动作要迅速。此外，维生素、氨基酸、无机盐等微量成分，可预先配成高浓度的贮备液，在配制培养基时再按配方比例取一定量加入培养液中即可。

②融化：将各成分混匀于水中，最好以流通蒸汽融化0.5h，如在电炉上融化应随时搅拌，如有琼脂成分时，应注意防止外溢。融化后，应注意补充失去的水分，补足至原体积。制备大量培养基时，除玻璃器皿外，还可用搪瓷桶、铝锅等容器加热融化，但不可用铜或铁锅，以免金属离子进入培养基中影响细菌生长。

③调整pH值：一般细菌用的培养基pH调整在6.8-7.2之间，但也有需要酸性或碱性的培养基。培养基在高压灭菌后，pH约降低0.1-0.2，故调整时应比实际需要的pH值高0.1-0.2。但有时也可降低0.4，因所使用的灭菌器不同而稍有不同。调整pH'值，用盐酸和氢氧化钠，因为在相同pH下有机酸比无机酸更易抑制微生物生长，因此除非特殊情况，最好不用乙酸等有机酸来调节pH。一般用精密pH试纸（精确到0.1pH单位）调整，必要时也可用酸度计。调时需注意逐步滴加，勿使过酸或过碱而破坏培养基中某些组分。

④过滤澄清：培养基配成后，一般都有沉渣或混浊，需过滤，使其清晰透明方可使用。液态培养基常用滤纸过滤；固态培养基如琼脂培养基，加热后需趁热用脱脂棉或多层纱布过滤。

⑤分装：将调整pH后的培养基按需要趁热分装于三角瓶或试管内，以免琼脂冷凝。分装量不宜超过容器的2/3，以免灭菌时外溢。分装时应注意勿使培养基粘附于管口与瓶口部位，以免沾染棉塞而滋生杂菌。可以通过下边套有橡皮管及管夹的普通漏斗进行分装。基础培养基一般常分装于三角瓶内，分装的量根据使用目的和要求决定，但必须定量分装，以便灭菌后使用。琼脂斜面分装量为试管容量的1/5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3。半固体培养基分装量约占试管长度的1/3，灭菌后趁热直立，待冷却凝固。高层琼脂分装量约为试管长度的1/3，灭菌后直立凝固待用。

琼脂平板是将灭菌后的培养基，冷却至50℃左右，在无菌条件下倾入灭菌平皿内。内径9cm的平皿倾注培养基约15ml左右，轻摇平皿底，使培养基平铺于皿底部，凝固后即成。倾注培养基时，切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。新制成的平板，表面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣置于37℃培养箱内约30min，待平板干燥后使用。

⑥灭菌：加热配制培养基后，在2h内进行灭菌处理。不要把未灭菌的培养基冷藏或存放。绝大多数培养基都应在高压灭菌器内于121℃灭菌，并应在达到这一温度后持续15min。糖类液态培养基或含有其他特殊成分的培养基，高压蒸汽灭菌会使其分解，要用滤膜过滤灭菌。或者将不耐热物质用其他方法灭菌（如流通蒸汽灭菌）后，再加入已灭菌的培养基中。

⑦检定；每批培养基制成后须经检定后方可使用。

⑧保存：配制好的培养基，不宜保存过久，以少量勤配制为宜。每批应注明制作日期。己灭菌的培养基可在4-10℃存放1个月。存放时应避免阳光直射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当发酵试管中的液体培养基存放在冰箱或者适中的低温下时，可能有空气溶解进去，以致在37℃培养时，会在管内形成空气泡。因此，凡存放在低温的发酵试管，使用前应先予以培养过夜，弃去有气泡的管子。液态培养基在室温下存放如超过一周，可能有水分蒸发，如果管内液体损失10%,应弃去不用。

（三）各种培养基的成分与制备

为减少配制中的误差，尽量选用市售己配好的综合培养基。

（1)营养琼脂培养基

蛋白胨 l0g

牛肉浸膏3g

氯化钠 5g

琼脂． 15-20g

蒸馏水 l000ml

将上述成分混合后，调节pH为7.4-7.6，过滤除去沉淀，分装于玻璃容器中，经121℃高压蒸汽灭菌15min,贮存于暗处备用。

(2）乳糖蛋白陈培养液

蛋白胨l0g

牛肉浸膏3g

乳糖5g

氯化钠 5g

1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lml

蒸馏水 1000m1

将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000m1蒸馏水中，调节pH为7.2-7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液lml，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min,贮存于暗处备用。

此培养基适用于检验大肠菌群时作发酵试验之用。根据实际需要，也可按上述配方比例（除蒸馏水外）配成二倍、三倍或五倍浓缩的乳糖蛋白陈培养液，制法同上。

(3)品红亚硫酸钠培养基（多管发酵用）

蛋白胨 l0g

乳糖 l0g

磷酸氢二钾 3.5g

琼脂 20-30g

蒸馏水 1000m1

无水亚硫酸钠 5g左右

5％碱性品红乙醇溶液 20m1

①贮备培养基：先将琼脂加至900m1蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使其溶解，再以蒸馏水补足至1000m1，调整pH为7.2-7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min。贮存于冷暗处备用。

②平板培养基：将上述贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1 : 50的比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中；再按1：200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡红色为止（不宜多加）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此种培养基适量（约15m1）倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。

(4)品红亚硫酸钠培养基（滤膜法用）

蛋白胨l0g

牛肉浸膏 5g

酵母浸膏 5g

乳糖 l0g

琼脂 20g

磷酸氢二钾3.5g

蒸馏水1000m1

无水亚硫酸钠约 5g

5％碱性品红乙醇溶液20m1

①贮备培养基：先将琼脂加至900m1蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使其溶解，再以蒸馏水补足至1000m1，调整pH为7.2-7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min。贮存于冷暗处备用。

②平板培养基：将上述贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按1 : 50的比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中；再按1：200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min灭菌。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡红色为止（不宜多加）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此种培养基适量（约15m1）倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。

(5）伊红美蓝培养基（EMB培养基）

蛋白胨 l0g

乳糖l0g

磷酸氢二钾2.0g

琼脂 20g

蒸馏水l 000ml

2％伊红（曙红eosin）水溶液20ml

0.5％美蓝（亚甲蓝methylene bluem）水溶液 13m1

①贮备培养基：先将琼脂加至900m1蒸馏水中，加热融化，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000m1，调整pH为7.2-7.4。趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min。贮存于冷暗处备用。

②平板培养基的配制：将贮备培养基加热融化。以无菌操作，根据瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量已灭菌的2％伊红水溶液及0.5％美蓝水溶液加入己融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。当混合好的培养基冷至45℃，便立即适量倾入已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置于冰箱备用。

(6）乳糖蛋白陈半固体培养基

蛋白胨l0g

牛肉浸膏 5g

酵母浸膏 5g

乳糖 l0g

琼脂 5g左右

蒸馏水 l000ml

将上述成分加热溶解于1000m1蒸馏水中，调整pH为7.2-7.4，过滤后分装于小试管内，置高压蒸汽灭菌器，在115℃灭菌20min。冷却后置于冰箱内保存。此培养基存放以不超过二周为宜。

(7) M-远藤氏培养基（M-Endo液态培养基）

胰胨或多膝 l0g

蛋白胨 l0g

酵母浸膏1.5g

乳糖12.5g

氯化钠 5.0g

磷酸氢二钾（K2HPO4) 4.375g

磷酸二氢钾（KH2PO4) 1.375g

硫酸十二烷基钠 0.050g

去氧胆酸钠 0.10g

亚硫酸钠 2.10g

碱性品红 1.05g

将上述成分置于含有20ml 95％乙醇的1000ml蒸馏水中。将培养基加热煮沸后，立即从热源移开，并冷却到45℃以下。不可用高压蒸汽灭菌。最后pH值应在7.1-7.3之间。
配好的培养基贮存于2-10℃的暗处，如存放超过96h应弃去。

(8) LES MF保存性培养基

胰胨 3.0g

M一远藤肉汤MF 3.0g

磷酸氢二钾（KZHP04) 3.0g

苯甲酸钠（sodium benzoate) 10g

磺酰胺(sulfanilamide) 1.0g

对氨基苯甲酸（paraamino benzoic acid) 1.2g

环己亚胺（cycloheximide) 0.5g

蒸馏水 1000ml

将上述成分溶于蒸馏水中，不可加热，最后声应为7.1±0.1。

(9) LES远藤氏琼脂培养基

酵母浸膏 1.2g

酪胨或胰酪胨 3.7g

硫胨 3.7g

胰胨 7.5g

乳糖 9.4g

磷酸氢二钾（K2HPO4) 3.3g

磷酸二氢钾（KH2PO4) 10g

氯化钠 3.7g

去氧胆酸钠 0.lg

硫酸十二烷基钠 0.05g

亚硫酸钠 1.6g

碱性品红 0.8g

琼脂 15.0g

蒸馏水 1000m1

将上述成分置于含有20ml 95％乙醇的1L蒸馏水中，加热沸腾后冷却到45-50℃，以4ml的量分装到直径为60mm的培养皿底部。如果使用其他大小的培养皿，则应调节分装的量，使其在皿底所占的厚度不变。平皿应放在2-10℃的暗处，两周后尚未使用应弃去。

（10) EC培养液

胰胨20g

乳糖5g

胆盐三号1.5g

磷酸氢二钾（K2HPO4) 4g

磷酸二氢钾（KH2PO4) 1.5g

氯化钠 5g

蒸馏水 1000m1

将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中，115℃灭菌20min。灭菌后pH应为6.9。

（11）M-FC培养基

胰胨 l0g

蛋白胨5g

酵母浸膏 3.0g

氯化钠5.0g

乳糖 12.5g

胆盐三号 1.5g

1％苯胺蓝水溶液 l0ml

1％玫瑰色酸溶液（溶于0.2mo1/L氢氧化钠液中） 10ml

蒸馏水l000ml

将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节pH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶l00ml，于115℃灭菌20min。贮于冰箱中备用。临用前，按上述配方比例，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1％苯胺蓝溶液lml及新配制的1％玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）1m1,混合均匀。加热溶解前，加入1.2%-1.5%琼脂可制成固体培养基。如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。

(12）缓冲蛋白胨水

蛋白胨l0g

氯化钠5.0g

磷酸氢二钠（Na2HPO2. 12H2O) 9.0g

磷酸二氢钾（KH2PO4) 1.5g

蒸馏水1000m1

加热溶解上述各组分，调节pH使其灭菌后为7.0，按需要分装培养基，121℃灭菌15min。

(13）四磺酸盐培养基（MullerKauffmann )

①基础培养基：

牛肉浸膏 5.0g

蛋白胨 l0.0g

氯化钠 3.0g

碳酸钙（CaCO3) 45.0g

蒸馏水 l000ml

加热溶解各成分，调节pH，使其灭菌后为7.0。121℃灭菌15min。

②硫代硫酸钠溶液：硫代硫酸钠（Na2S2O3 . 5H2O) 50g溶于少量蒸馏水中，再加蒸馏水至100ml。 121℃灭菌15min。

③碘溶液：

碘 20g

碘化钾 25g

蒸馏水 加至l00ml

加少量水溶解碘化钾，再加碘，然后振摇使其完全溶解，加蒸馏水至100m1。贮存于密封的棕色瓶中。

④煌绿溶液：

煌绿约 0.5g

蒸馏水 l00ml

将煌绿加入蒸馏水中振摇使其溶解，加热溶液使其沸腾后持续30min，冷却后贮存在棕色瓶中，于暗处保存。

⑤牛胆汁溶液：

牛胆汁（脱水） l0g

蒸馏水 l00ml

将牛胆汁加入蒸馏水中，煮沸溶解，121℃灭菌15min。

⑥完成培养基：

基础培养基 900rn1

硫代硫酸钠溶液 l00ml

碘液 20m1

煌绿溶液 2ml

牛胆汁溶液 50ml

在无菌操作下，依次加入各种培养基，每加入一种成分都要充分混匀。然后将混匀后的培养基分装在已灭菌的试管或瓶中。4℃暗处保存不得超过一周。

（14）孔雀绿一氯化镁培养基（rappaport)

①溶液A:

胰胨 5.0g

氯化钠 8.0g

磷酸二氢钾（KH2PO4) 1.6g

蒸馏水l000rn1

将各成分混合溶解。

②溶液B：将氯化镁（MgC12. 6H2O) 40g溶解于loom]蒸馏水中。

③溶液C：将孔雀绿0.4g溶解于700m1蒸馏水中。

④完成培养基：

溶液A 1000ml

溶液B l00ml

溶液C 30m1

混合上述各溶液，分装于试管或烧瓶中，115℃灭菌20min,贮存于冰箱中，可保存1个月。

（15)双倍浓度亚硒酸盐F培养基（leifson )

蛋白胨 l 0.0g

甘露醇 20.0g

磷酸氢二钠（Na2HPO4) 8.0g

亚硒酸氢钠 8.0g

蒸馏水 1000ml

依次将上述各成分溶解于水中，调节pH到7.1，过滤灭菌，按需要分装培养基，贮存在4℃条件下，不宜超过一周。制备单倍浓度的亚硒酸盐F培养基可以加入蒸馏水进行适当的稀释。

（16）煌绿酚红培养基

①基础培养基：

牛肉浸膏40g

蛋白胨 l0g

氯化钠 3.0g

磷酸氢二钠 0.8g

磷酸二氢钠 0.6g

琼脂12g

酵母浸膏3.0g

蒸馏水 900ml

加热溶解上述各组分。调节pH使其灭菌后为7.0，然后分装在试管或瓶中，每瓶不得超过500ml。121℃灭菌15min。

②糖一酚红溶液：

乳糖l0g

蔗糖l0g

水溶性酚红 0.09g

蒸馏水 100m1

将上述成分溶于水中，70℃水浴上加热20min，冷却至55℃立即使用。

③煌绿溶液：同培养基（13)。

④完成培养基：

基础培养基 900ml

糖一酚红溶液 l00ml

煌绿溶液 lml

在无菌条件下，将煌绿溶液加入到约55℃的糖一酚红溶液中，在50-55℃下与基础培养基混合。

（17）亚硫酸锡琼脂培养基

①基础培养基：

牛肉浸膏 5g

蛋白胨 l0g

氯化钠 5g

琼脂 20g

蒸馏水 1000m1

加热溶解各成分，按每份l00ml的量分装于250m1三角瓶中，121℃下灭菌20min。

②亚硫酸秘贮备液：

柠檬酸铋铵6g

亚硫酸钠（Na2SO3)20g

磷酸氢二钠（Na2HPO4) l0g

葡萄糖（C6H12O6 · H2O) l0g

蒸馏水200ml

将柠檬酸铋铵溶解于50ml沸水中，同时将亚硫酸钠溶解于l00ml沸水中，混合两液并煮沸3min，趁热加磷酸盐搅拌至溶解。冷却后，加入剩余的50ml葡萄糖水溶液，贮存于冰箱中。

③柠檬酸铁煌绿贮备液：

柠檬酸铁2g

煌绿（(1％水溶液） 25ml

蒸馏水 200ml

将上述成分溶解于水中，盛于已灭菌的玻璃瓶内，贮存于冰箱。

④完成培养基：

基础培养基l00ml

亚硫酸铋贮备液20m1

煌绿贮备液4.5m1

加热融化基础培养基并冷却到50℃，同时分别加热两种贮备液至50。在无菌操作下将后者加入到前者中去，充分混合，无菌倾入已灭菌的培养皿中。

（18）三铁糖琼脂培养基

牛肉浸膏3.0g

酵母浸膏3.0g

蛋白胨 20.0g

氯化钠 5.0g

乳糖l 0.0g

蔗糖l0.0g

葡萄糖 1.00g

柠檬酸铁 0.3g

硫代硫酸钠0.3g

酚红 0.024g

琼脂 12g

蒸馏水 l000ml

煮沸溶解各成分，调整pH使其灭菌后为7.4。将l0ml培养基分装于17-18mm直径的试管中，115℃灭菌10min。灭菌后将试管内培养基摆成斜面，斜面底部应有2.5cm高。

(19）尿素琼脂

①基础培养基：

蛋白胨 1g

葡萄糖 1g

氯化钠 5g

磷酸二氢钾 2g

酚红0.012g

琼脂15g

蒸馏水 l 000m1

煮沸溶解各成分，121℃灭菌15min 。

②尿素溶液：

尿素40g

蒸馏水 l00ml

将尿素溶解于水中，过滤灭菌。

③完成培养基：

基础培养基 950m1

尿素溶液50ml

在无菌条件下，将尿素溶液加入基础培养基，调整pH为6.8。将完成培养基10ml加入灭菌的试管中。

(20）苯丙氨酸琼脂培养基

酵母浸膏3g

DL-苯丙氨酸 2g

磷酸氢二钠 1g

氯化钠 5g

琼脂12g

蒸馏水 l000ml

煮沸溶解各成分，分装在试管中，121℃灭菌15min。灭菌后将培养基摆成斜面。

氯化铁溶液：制备10％的氯化铁溶液。溶液放于棕色瓶中，瓶子置于冰箱内。

(21）吲哚反应试剂

①胰蛋白胨色氨酸培养基：

胰蛋白胨l0g

氯化钠 5g

DL-色氨酸lg

蒸馏水 l000ml

将上述成分溶解于蒸馏水中，再分装于试管，每管约5m1. 121℃灭菌15min。

② Kovacs试剂：

对-二甲氨基苯甲醛 5g

18-1.19) g/ml25m1

2-甲基丁烷 75ml

将上述各组分混合。

(22）赖氨酸脱羧培养基

L-盐酸赖氨酸 5g

酵母浸膏 3g

葡萄糖 1g

溴甲酚紫 0.015g

蒸馏水l000ml

煮沸溶解各成分，调整pH使其灭菌后为6.8。以5m1的量将培养基分装于直径8 mm的试管中，培养基高度约为160mm。121℃灭菌l0min。

(23)β-半乳糖普酶试剂

①缓冲液：

磷酸二氢钠6.9g

氢氧化钠(0.lmol/L） 约3ml

蒸馏水加至50ml

将磷酸二氢钠溶解于45ml蒸馏水中，用约3m1的氢氧化钠溶液调整pH为7.0。最后加水至50m1,贮存于冰箱中。

②ONPG溶液：

2-硝基苯-β-D半乳糖吡喃糖苷(ONPG )溶液 80mg

蒸馏水 15m1

将ONPG在50℃溶解于水中，冷却溶液。

③完成试剂：

缓冲液 5m1

ONPG溶液 15ml

混合两种溶液。

(24)叠氮化钠葡萄糖肉汤

牛肉浸膏 4.5g

胰蛋白胨 15.0g

葡萄糖 7.5g

氯化钠 7.5g

叠氮化钠 0.2g

溴甲酚紫（也可不加） 0.015g

琼脂 20.0g

蒸馏水 1000m1

将各成分溶解于蒸馏水中，调节pH使灭菌后为7.2±0.1，分装于试管内，每管约l0ml。121℃灭菌15min。

(25）乙基紫叠氮化钠肉汤

胰胨（或蛋白胨） 20g

葡萄糖 5g

氯化钠 5g

磷酸氢二钾 2.7g

磷酸二氢钾 2.7g

叠氮化钠 0.4g

乙基紫 0.00083g

蒸馏水 l000ml

将上述各成分溶解于蒸馏水中，调节pH为7.0左右，分装于试管内，每管约10ml。

121℃灭菌15min。

(26) KF链球菌琼脂培养基

胰胨（或蛋白胨） l0g

酵母浸膏 l0g

氯化钠 5g

甘油磷酸钠 l0g

麦芽糖 20g

乳糖 10g

叠氮化钠 0.4g

溴甲酚紫（也可不加） 0.015g

琼脂 20g

蒸馏水1000m1

1%2,3,5一三苯基四唑化氯水溶液 l0ml

根据需要，按上述配方比例将各组分（除2,3,5-三苯基四唑化氯水溶液外）加热溶解于蒸馏水中，再煮沸15min灭菌。待冷却至50-60℃时，于每l00ml培养基内加入已灭菌的1%2,3,5-三苯基四溴化氯水溶液1m1,混匀。必要时用10％碳酸钠校正pH为7.2,倾注入灭菌平皿中制成平板待用。制成的平板在4℃±2℃的暗处可存放30d。

(27）胆汁-七叶苷-叠氮化物琼脂培养基

蛋白胨20g

酵母浸膏 5.0g

牛胆汁（脱水的） l0g

氯化钠 5.0g

七叶苷 1.0g

柠檬酸铁（III)铵 0.5g

叠氮化钠（NaN3)0.15g

琼脂 15g

蒸馏水加至 l00oml

加热溶解上述各成分，调整pH使其灭菌后为7.1±0.1. 121℃灭菌15min，冷却至50-600C，倒入平皿中，其深度至少为3mm。