一、实验目的

掌握以薄层色谱法(TLC)测定酱油中糖精钠(C6H4CONNaSO2)含量的原理与方法。

二、实验原理

在酸性条件下，食品中的糖精钠经乙醚提取、浓缩、薄层色谱分离、显色后，与标准品比较，可实现定性与半定量分析。

三、仪器与试材

1．仪器与器材

展开槽、薄层板(10cm×20cm)、玻璃喷雾器、微量注射器等。

2．试剂

除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

(1)常规试剂：乙醚(不含过氧化物)、HCl、NaOH、CuSO4·5H2O、正丁醇、氨水、异丙醇、无水Na2SO4、无水乙醇、95％．乙醇、聚酰胺粉(200目)、可溶性淀粉、溴甲酚紫。

(2)常规溶液：HCl溶液(1+1，体积比)、NaOH溶液(40g／L)、乙醇溶液(50％，体积分数)、CuSO4溶液(100g／L，将10gCuSO4·5H2O以水溶解并定容至100mL)、正丁醇一氨水一无水乙醇展开剂(7+1+2，体积比)、异丙醇一氨水一无水乙醇展开剂(7+1+2，体积比)。

(3)溴甲酚紫显色剂(0.4g／L)：称取0.04g溴甲酚紫，以乙醇溶液溶解后，用NaOH溶液调节pH为8，定容至100mL。

(4)糖精钠标准溶液(1mg／mL)：取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，以95％乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，再以95％乙醇稀释至刻度。

3．实验材料

2～3种酱油，各250mL。

四、实验步骤

1．样品提取

(1)取20．0mL酱油，置于100mL容量瓶中，加水至约60mL后，加20mLCuSO4溶液，混匀，再加4．4mLNaOH溶液，加水至刻度，混匀，静置30min，过滤。

(2)取50mL滤液置于150mL分液漏斗中，加2mI．HCl溶液，用30mL、20mL、20mL乙醚分三次提取，合并乙醚提取液。

(3)以5mLHCl酸化的水洗涤乙醚提取液，弃水层。乙醚层以无水Na2SO4脱水后，使乙醚挥发，加2．0mL乙醇溶解残留物，密封保存，备用。

2．薄层板的制备

(1)称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约7.0mL水，研磨3～5min。

(2)立即涂成0．25～0.30mm厚的10cm×20cm的薄层板，室温干燥后，在80℃下干燥1h。置于干燥器中保存，备用。

3．测定

(1)在薄层板纵向的一端(这一端称为下端，另一端称为上端)2cm处，用微量注射器分别点10μL、20μL样品提取液，同时点3.0μL、5.0／μL、7.0μL、10.0μL糖精钠标准溶液，各点间距大于1.0cm。

(2)将点好的薄层板放入盛有展开剂(两种展开剂任选一种，展开剂液层约0.5cm，薄层板下端朝下)并预先已达到饱和状态的展开槽中，展开至l0cm左右后，取出，挥干。

(3)均匀喷雾显色剂于薄层板上，糖精钠斑点显黄色。根据样品点和标准点的Rf值进行定性，根据斑点颜色深浅进行半定量。

4．计算

根据下式计算样品中糖精钠的含量：

X=m0/[V×(V2/V1)]

式中，x为样品中糖精钠的含量，g／L；m0为测定用样液中糖精钠的质量，mg；V为样品的体积，mL；V1为样品提取液残留物加入乙醇的体积，mL；V2为点板液的体积，mL。

五、注意事项

本方法可以同时分析酱油中苯甲酸钠的含量。

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