一、实验目的

掌握紫外分光光度法测定糕点中糖精钠的原理与方法。

二、实验原理

在酸性条件下，以乙醚提取样品中的糖精钠(C6H4CONNaSO2)，经薄层色谱分离后，溶于NaHCO3溶液中，该溶液在270nm处有吸收峰，测A270nm值，与标准品比较，可实现定量分析。

三、仪器与试材

1．仪器与器材

紫外分光光度计、紫外分析仪、透析用玻璃纸、薄层板(10cm×20cm)、展开槽、微量注射器等。

2．试剂

除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

(1)常规试剂：无水Na2SO4、硅胶GF254、乙醚(不含过氧化物)、HAc、NaHCO3、NaOH、HCl、CuSO4·5H2O、苯、乙酸乙酯、95％乙醇、羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)、溴甲酚紫。

(2)常规溶液：乙醇溶液(1+1，体积比)、CMC-Na(0.5％)、NaHCO。溶液(2％，质量分数)、NaOH溶液(0.8g／L、40g／L)、HCl溶液(1+1，体积比)、CuSO4溶液(100g／L，将l0gCuSO4·5H2O以水溶解并稀释至100mL)、苯乙酸乙酯一乙酸展开剂(12+7+3，体积比)。

(3)溴甲酚紫显色剂(0．4g／L)：取0.04g溴甲酚紫，以乙醇溶液溶解后，用NaOH溶液调pH至8，并定容至100mL。

(4)糖精钠标准溶液(1mg／mL)：称取0．0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，加95％乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度。

3．实验材料

2～3种糕点，各50g。

四、实验步骤

1．样品提取

(1)称取25.0g混合均匀的糕点样品，置于透析用玻璃纸上，放入大小适当的烧杯内，加50mLNaOH溶液(0．8g／L)，调成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200mLNaOH溶液(0．8g/L)的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。

(2)量取125mL透析液(相当于12．5g样品)，加约0．4mLHCl溶液调pH至中性，加20mLCuSO4溶液，混匀，再加4．4mLNaOH溶液(40g／L)，混匀，静置30min，过滤。

(3)取120mL滤液(相当于10g样品)，置于250min分液漏斗中，加2mLHCl溶液，以30mL、20mL、20mL乙醚分别提取三次，合并乙醚提取液，用5mL经HCl酸化的水洗涤一次，弃水层。

(4)乙醚层通过无水Na。SO。脱水后，挥发乙醚，加2．0mL乙醇溶液溶解残留物，密封保存，备用。

2．薄层展开

(1)称取1.4g硅胶GF254，加4.5mLCMC-Na溶液于小研钵中研匀，倒在薄层色谱用玻璃板上，涂成0.25～0．30mm厚的薄层板，晾干后，于110℃下活化lh，取出后置于干燥器内，备用。

(2)在薄层板纵向的一端(这一端称为下端，另一端称为上端)2cm处中间，用微量注射器点样，将200～400μL样液点成一横条状，再在点样条右侧1.5cm处，点10μL糖精钠标准溶液，使成一个小圆点。

(3)将点好的薄层板(下端朝下)放入盛有展开剂液层约0.5cm并预先已达到饱和状态的展开槽中，展开至10cm左右，取出，挥干。

(4)将薄层板置于紫外分析仪254nm波长下，与标样比较，观察糖精钠的荧光条状斑。把斑点连同硅胶刮入小烧杯中，同时在空白薄层板(除了不点样外，其他处理过程同样品薄层板)上刮一条与样品条状大小相同的硅胶，置于另一烧杯中，作为试剂空白。

(5)各加5．0mLNaHCO3溶液，于50℃水浴中保温30min后，以3000r／min离心20min，

取上清液，备用。

3．测定

(1)吸取0、2．0mL、4．0mL、6．0mL、8．0mL、10．0mL糖精钠标准溶液，分别置于100mL容量瓶中，各以NaHCO3溶液定容，于270nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

(2)将经薄层展丌分离的样品糖精钠提取液及试剂空白液于270nm处测定吸光度，从标准曲线七查出相应浓度。

4．计算

根据下式计算样品中糖精钠的含量(g／kg)：

糖精钠的含量=（c1—c0）V3V1/mV2

式中，c1为测定用样液中糖精钠的含量，mg／mL：c0为空白液中糖精钠的含量，mg／mL：V1为溶解样品残留物时加入的乙醇的体积，mL：，V2为点样用样品提取液的体积，mL；V3为溶解刮下的糖精钠时所用2％NaHCO3溶液的体积，mL，：m为与提取过程中样品残留物相当的原样品的质量，g。

五、注意事项

1．对富含脂肪的样品，为防止乙醚萃取时发生乳化，可先在碱性条件下用乙醚萃取脂肪，然后酸化，以乙醚提取糖精。

2．样品在薄层板上的点样量，应控制其中的糖精含量为0．1～0．5mg。

3．在刮取样品的条状糖精斑点时，可以先用铅笔在紫外分析仪中，轻轻勾出斑点的轮廓，然后在紫外分析仪外，小心将斑点硅胶刮人小烧杯中。同时刮一块与样品斑点条状大小相同的空白板硅胶。

4．硅胶GF254薄层板亦可用聚酰胺薄层板替代，具体参考条件如下：1.6g聚酰胺，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨35min，使其均匀地涂成0．25～0．30mm厚的10cm×20cm薄层板，室温下干燥，在80℃烘箱中干燥lh，置干燥器内备用。展开剂为正丁醇-浓氨水-无水乙醇(7+1+2，体积比)。

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