分光光度计是由光学、精密机械装置和电子技术三者精密结合的产物。新仪器启用时，必须对其主要性能指标进行全面检测；在使用过程中也要定期进行检查。做性能检测时应在仪器开机预热30min后进行。正确的安装、使用和定期对仪器性能检测检查，是获得准确可靠的分析结果的前提，同时也能延长仪器的使用寿命。

1．实验目的

1)掌握分光光度计的使用方法。

2)学会分光光度计的性能检查方法。

3)了解分光光度计各部件的作用。

2．仪器与试剂

(1)仪器

Evolution220 (Ev 220)紫外-可见分光光度计；25mL容量瓶、10mL吸量管、1 cm玻璃比色皿、洗耳球、400mL烧杯、滤纸条、脱脂棉纱布。

(2)试剂

0.05 mol/L H₂SO₄溶液1瓶、0.1 mol/L HCl溶液1瓶、150ug/mL K₂Cr₂O₇储备液、10000ug/mL CoC1₂储备液、10000ug/mL CuSO₄储备液。

3．实验原理

实验数据是否可靠取决于仪器性能的优劣，因此在使用前或每隔一定时间都要对仪器进行检查。

光度计要选取波长，这就要求显示的数字与实际透过光的波长一致，波长精度即衡量指标。光度计的稳定性由同一溶液多次重复读数的重现性来体现。符合朗伯-比尔定律的溶液，在合适的浓度范围内吸光度与浓度应是线性关系，偏离的程度则用线性误差表示。溶液浓度的变化导致吸光度的变化，二者之比(△A/△c)称为灵敏度。灵敏度越高，意味着所能测出的浓度越低。

本实验对所用分光光度计进行波长精度、线性误差、灵敏度以及重现性四个方面的性能检查。

4．实验步骤

(1)波长精度检查

用6000ugML CoCI₂溶液(所有CoCI₂溶液稀释时，要使用0.10mol/L HCl为溶剂)，以0.10mol/L HCI为空白，每隔2nm在490～520nm范围内分别测定其对应的A值，画出所测得的吸收曲线，找出最大吸收波长(λmax)，再与理论值进行比较。

波长精度的计算公式为

波长精度＝实测值－理论值(理论值为510nm)

对于WFZ-800-D2型紫外-可见分光光度计，波长精度应符合以下规定：

(2)线性误差检查

以不同浓度的K₂Cr₂O₇、CoCI₂和CuSO₄(所有K₂Cr₂O₇、CuSO₄溶液稀释时，要使用0.05mol/L H₂SO₄为溶剂)按下表所示波长进行测定。(测CoCI₂溶液A值时用0.10mol/L HCl作空白，测K₂Cr₂O₇和CuSO₄溶液时以0.05mol/L H₂SO₄为空白。)

用仪器分别测量以上各个溶液的吸光度，每一浓度的溶液必须重复测量三次，取其平均值，将记录的吸光度与对应溶液浓度，按下列公式计算各点的线性误差。

式中，c₁、c₂、c₃为同一种溶液不同的三个浓度；A₁、A₂、A₃为测得的相应吸光度；K为理想直线的斜率；A'₁、A'₂ 、A'₃为c₁、c₂、c₃浓度在理想直线上的吸光度。

对于VWFZ-800-D2型紫外-可见分光光度计在吸光度为0.3～0.8(即透光率为16％～80％)的范围内，用符合朗伯-比尔定律的溶液进行测定。其吸光度与溶液浓度的误差应符合以下规定：

(3)灵敏度检查

按下表浓度在指定波长下用仪器分别测量吸光度，设每种溶液的两个浓度间的变化值为△c，测得相应吸光度的变化值为△A，则

灵敏度＝△A/△c

对于WFZ-800-D2型紫外-可见分光光度计，仪器的灵敏度应符合下表的规定。

(4)重现性检查

将波长固定在690nm，用2000ug/mL CuSO₄溶液，以0.05mol/L H₂SO₄溶液为空白，连续重复测定7次该溶液的透光率。

对于WFZ-800-D2型紫外-可见分光光度计，仪器在同一工作条件下，用同一种溶液连续重复测定7次，其透光率最大读数与最小读数之差不应大于0.5％。

(5)实验数据记录及数据处理(data processing)