样品容量选择

估计样品体积对于实验是必需的。在实验中至少应消耗2.0mg/L溶解氧并在BOD瓶中留下至少1.0mg/L溶解氧。
有些样品，如未处理的污水有较高的生化需氧量，采样必须少量，因为样品体积过大会消耗掉所有的氧。BOD低的水样必须使用大样品以确保有足够的氧气被消耗从而得到准确的结果。

实验室所处的海拔高度会影响能够溶入水的氧气的量［详见不同海拔的氧气饱和度(20℃)]。在较高海拔处，能溶解进水的氧气量变少，因此提供给微生物的氧气也更少。

具体步骤如下。

(1)参考最小样品量表格来选择最小的样品体积。例如：如果估计一个污水样品含有300mg/LBOD，最小的样品量为2mL。对于预估40 mg/L生化需氧量的污水，最小样品量为15mL。

(2)参考最大样品量表格来选择最小的样品体积。在1000ft(304.8m)海拔高度时，对于预估生化需氧量为300mg/L的样品，最大的样品量为8mL。对于预估生化需氧量为40mg/L的样品，最大的采样量为60mL(同样在1000ft海拔高度)。

(3)在最大和最小量之间选择两个或更多的其他样品量，使得总共有四或五个样品。

表6.3.7-3最小采样量

表6.3.7-4最大采样量①

①高浓度样品应预先根据标准方法进行稀释。

表6.3.7-5不同海拔高度时氧气的饱和度(20℃)

计算方法—标准方法。当需要向管理机构汇报结果时，使用标准方法计算。

对未接种的稀释水：

对接种后的稀释水：

式中，BOD₅为五日生化需氧量；D₁为准备后水样中溶解氧的含量，mg/L; D₂为在20℃下培养5天后的水样中溶解氧的含量，mg/L; P为水样在培养液中所占比例；B₁为接种稀释水在培养前的溶解氧含量，mg/L; B₂为接种稀释水在培养后的溶解氧含量，mg/L; f为菌液在样品中的比例和在细菌质控样中的比例的比值。

如果加入了硝化抑制剂则将结果记为CBOD₅。

如果不止一个稀释水样满足以下所有标准，可以用平均结果来表示：①剩余的溶解氧至少为1 mg/L;②最终溶解氧量至少比最初的溶解氧量低2mg/L;③高浓度样品没有毒性；④没有明显的异常情况。

干扰物质

许多含氯的废水和工业废水需要进行特殊处理以确保可靠的BOD值。通常情况下，用特定的样品仔细进行实验会指出实验程序中部分内容需要修改。

样品中的毒素会对水样中的微生物产生不利影响，并导致BOD值偏低。

消除少量余氯的办法：将样品在室温下静置1～2h。对于含有大量余氯的样品，根据以下方法以决定加入到样品中的硫代硫酸钠的量。

①量取100mL样品倒入250mL锥形瓶中。用10mL血清移液管和洗耳球，吸取10mL的0.020N标准硫酸溶液和10mL碘化钾溶液(100g/L)到烧杯中。

②添加二滴淀粉指示剂并摇匀。

③用0.025N硫代硫酸钠标准溶液装满25mL滴定管，并对样品进行滴定，从深蓝到无色。

④计算加入到样品中的0.025N硫代硫酸钠标准溶液的量：

⑤将所需的0.025N硫代硫酸钠标准溶液加入到样品中。充分混合。在BOD实验开始前等待10～20min。

为了消除酚类、重金属和氰化物的影响，用高质量蒸馏水稀释样品。或者：在稀释水中培养的菌种能适应这类物质。按如下步骤驯化菌种。

①用生活污水装满1gal(3.78541L)的不锈钢或塑料容器并向其中鼓气24h，使重的物质沉降下来。

②沉降1h以后，用虹吸管吸出三夸脱物质丢弃。

③用90％的污水和含10％有毒物质的废物装满容器。

④曝气24h。增加废物的量重复步骤②和③，直到容器中装有100％的有毒废物。

对于BOD实验最适合的pH值在6.5～7.5之间。如果pH值不在此范围内，用磷酸缓冲液或1N硫酸或氢氧化钠标准溶液将样品的pH值调整到7.2。

冷的样品中氧含量可能过饱和，BOD值偏低。向一夸脱瓶中装冷的样品溶液到一半，并用力摇匀2min。允许样品的温度到达20℃，然后再摇匀2min。

准确度检查方法—ezGGA方法

准确度检查需要的仪器和试剂有：Voluette安瓿瓶装BOD标准溶液，300mg/L，10mL(300mg/L葡萄糖和300mg/L谷氨酸)；接种稀释水；4个BOD瓶；1.0～4.0mL A级移液管或1～10mLTenSette移液枪和枪头；溶解氧测量仪器。

(1)用LBOD探针测量DO

①将需要的菌种添加到300mL BOD瓶中。

②用稀释水装满BOD瓶直到水面接近瓶颈部毛玻璃1/4ft处。

③把2mL标准BOD安瓶瓶放入安瓿瓶开口器中，并用去离子水清洗。

④将安瓿瓶和开口器放在BOD瓶的上方。

⑤用安瓿瓶开口器打开安瓿瓶并让它滑进BOD瓶。在驯化过程中将安瓿瓶放在BOD瓶中。

⑥遵循BOD实验的常规步骤。

⑦计算标准溶液中的BOD浓度。小瓶中的2mL相当于用标准方法准备好的6mL。按照在瓶中加入6mL样品计算BOD浓度。对于这种标准，稀释倍数是50倍。

(2)用克拉克标准电池测量DO

①将需要的菌种添加到300mL BOD瓶中。

②用安瓿瓶开口器打开安瓿瓶。

③将安瓿瓶里的东西倒入BOD瓶中。在瓶子的边缘轻打安瓿瓶以倒出里面的东西。在使用克拉克标准电池时不要把安瓿瓶放入BOD瓶里。

④用缓冲稀释水装满安瓿瓶并在BOD瓶中加入水。

⑤重复步骤④。

⑥将稀释水装入BOD瓶直到水面接近瓶颈部毛玻璃1/2ft处。

⑦遵循BOD实验的常规步骤。

⑧计算标准溶液中的BOD浓度。小瓶中的2mL相当于用标准方法准备好的6mL。按照在瓶中加入了6mL样品计算BOD浓度。对于这种标准，稀释倍数是50倍。

相关链接：生化需氧量稀释法，方法8043（一）