一、案例

乳粉是人们熟悉的营养品，它除了提供丰富的蛋白质、脂肪等营养物质外，还含有大量的维生素。维生素A又名视黄醇，只存在于动物组织中，在植物体内则以胡萝卜素的形式存在。维生素A为条状淡黄色晶体，熔点62～64℃，不溶于水，能溶于乙醇、甲醇、氯仿、乙醚和苯等有机溶剂，易被氧化破坏，对酸不稳定。
维生素E又称生育酚，属于酚类物质，为黄色油状液体，溶于脂溶性溶剂，对热稳定，在酸性环境比碱性环境稳定，在无氧条件下，对热与光以及对碱性环境也相对较为稳定。

二、选用的国家标准

GB／T 5009．82 2003食品中维生素A和维生素E的测定。

三、测定方法

1．皂化

称取适量样品1.0～10.0g(含维生素A约3μg，维生素E各异构体约40μg于皂化瓶中，加30mL无水乙醇，振摇使样品分散；加入5mL 100g／L抗坏血酸溶液和2.00mL苯并[e]芘溶液(5μg／L，内标用)，混匀，加10mL 50％氢氧化钾溶液，混匀，于沸水浴上回流30min，使皂化完全，皂化后立即放入冰水中冷却。

2．提取

将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL水分2～3次洗皂化瓶，洗液并人分液漏斗中；用100mL无水乙醚分2次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中；轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层；每次用约50mL水将乙醚液洗至中性，约4～5次。

3．浓缩

将乙醚提取液经无水硫酸钠(约5g)滤入与旋转蒸发器配套的250～300mL球形蒸发瓶内，用约100mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入蒸发瓶内，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中乙醚剩下约2mL时，取下蒸发瓶，用氮气吹于乙醚，随即加入2mL乙醇，充分混合、溶解提取物；将乙醇液移人塑料离心管中，于3000r／min下离心5min，上清液供色谱分析用。

4．液相色谱分析

色谱推荐条件如下。

预柱：ODS 10μm，4mm×4．5cm

分析柱：ODS 5μm，4．6mm×25cm。

流动相：甲醇：水= 98：2，混匀，临用前脱气。

紫外检测器波长：300nm，量程0.02。

进样量：20μL。
流速：1．65～1．70mL／min。

5．计算

式中 X——某种维生素的含量，mg／100g；

p——由标准曲线上查到某种维生素的含量，μg／mL；

γ——样品浓缩定容体积，mL；

m——样品质量，g。

6．试剂

（1）无水乙醚：不含有过氧化物。

（2）无水乙醇：不得含有醛类物质。

检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。

脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾入1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天(不时摇动，促进反应)，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。

（3）无水硫酸钠。

（4）甲醇：重蒸后使用。

（5）重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。

（6）抗坏血酸溶液(100g／L)：临用前配制。

（7）氢氧化钾溶液(1+1)。

（8）氢氧化钠溶液(100g／L)。

（9）硝酸银溶液(50g／L)。

（10）银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液(50g／L)中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液(100g／L)数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。

（11）维生素A标准液：视黄醇(纯度85％)或视黄醇乙酸酯(纯度90 %)经皂化处理后使用。用脱醛乙醇溶解维生素A标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg视黄醇。临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。

（12）维生素E标准液：α-生育酚(纯度95％)，γ-生育酚(纯度95％)，δ-生育酚(纯度95％)。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1mL相当于1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此三种维生素E的准确浓度。

（13）内标溶液：称取苯并[e]芘(纯度98％)，用脱醛乙醇配制成每1mL相当于10μg苯并[e]芘的内标溶液。

（14）pH= 1～14试纸。