一、水产品中无机砷检验

水产品中无机砷的测定主要采用酸提取法、减压蒸馏法及溶剂萃取法进行提取分离，通过氢化物原子荧光分光光度法、原子吸收法或银盐法检测，或采用仪器联用技术如HPLC和ICP-MS、HG-AFS、ICP-AAS、ICP-AES的联用等方法进行分离和测定。我国国家标准检验方法为氢化物原子荧光光度法及银盐法(GB/T 5009.11)，两者均采用酸提取后直接测定，方法简便。液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(GB/T 23372)可以同时进行砷的形态分析。

(一)酸提取法

样品在6mol/L盐酸溶液中，经水浴加热后，无机砷以氯化物的形式被提取，实现无机砷和有机砷的分离。然后在2mol/L盐酸条件下用氢化物原子荧光光度法或银盐法测定总无机砷。

在提取时，为了防止泡沫的影响，可加辛醇作消泡剂。本方法的检出限分别为0.04mg/kg和0.1mg/kg。

氢化物原子荧光光度法仪器参考条件为：光电倍增管负高压：30V;砷空心阴极灯电流：40mA；原子化器高度：9mm；载气流速：600ml/min；读数延迟时间：2秒；读数时间：12秒；读数方式：峰面积；标准溶液或试样加入体积：0.5ml。

(二)减压蒸馏法

样品中五价砷经碘化钾还原为三价砷，与盐酸作用生成三氯化砷，经减压蒸馏(减压蒸馏装置见图11-5)，三氯化砷能挥发逸出，冷凝并吸收于水中，而有机砷既不分解也不挥发逸出，以达到分离的目的。然后按银盐分光光度法测定无机砷的含量。

图11-5 减压蒸馏装置

1．通气管；2．单管蒸馏头；3.短颈球瓶；4．冷凝器；5．真空蒸馏接受管；

6.梨形烧瓶；7．水银压力计；8安全瓶；9．真空泵

(三)溶剂萃取法

样品中五价砷经碘化钾还原为三价砷，在8mol/L以上盐酸介质中被乙酸丁酯或苯等有机溶剂所萃取，此时有机砷不被萃取。利用无机砷在小于2mol/L盐酸介质中易溶于水的性质，将有机溶剂萃取液加水稀释，有机溶剂中三价砷被反萃取于水中，然后用银盐法测定无机砷的含量。

(四)液相色谱-电感耦合等离子体质谱法

1．原理样品中无机砷经提取、净化后，用液相色谱仪对砷的各种形态进行分离，电感耦合等离子体质谱仪检测。根据保留时间定性，标准曲线法定量。

2．分析步骤准确称取粉碎的样品适量，加水，混匀后超声波萃取，加入乙酸溶液沉淀蛋白，于4℃冰箱中静置，上清液经滤膜过滤和离心；样品处理液和标准工作液分别经液相色谱分离，电感耦合等离子体质谱仪检测。以保留时间定性，峰面积计算样液中被测物质的含量。

液相色谱分离参考条件：阴离子保护柱IonPac AG19(50mm×4mm)或相当者；阴离子分析柱IonPac AG 19(250mm×4mm)或相当者；流动相：A相组成(10mmol/L无水乙酸钠，3mmol/L硝酸钾，2mmol/磷酸二氢钠，0.2mmol/L乙二胺四乙酸铁钠，4%氢氧化钠水溶液调pH=10.7), B相组成(无水乙醇), A+B(99+1)；流速：1.0ml/min；进样量：5～50ul。

电感耦合等离子体质谱参考条件：积分时间：0.5秒；功率：1550W ;雾化器：同心雾化器，自动提升。载气流量：0.60～1.20L/min；辅助气流量：与载气流量的总和保持在1.0～1.2L/min ;采样深度：9.5mm；采集质量数：砷75；灵敏度：中质量数≥300Mcps/(mg/L)；进样管内径≤0.2mm ;载气：氩气，纯度≥99.999%；色谱柱与ICP-MS相联的管线距离不超过0.5m。

3．方法说明

(1)该方法可以同时分析包括砷酸根As(V)、亚砷酸根As(Ⅲ)、砷甜菜碱、一甲基砷、二甲基砷五种形态砷。适用于海产品、乳及其制品、肉类及果蔬等食品中无机砷的测定。方法检出限为As(Ⅲ)0.002mg/kg，As(V)0.004mg/kg。

(2)油脂含量高的动物性样品需过聚二乙烯基苯聚合物反相填料(或等效的脱脂柱)的样品前处理柱去除油脂。蔬菜等色素较深的样品经石墨化炭黑小柱去除颜色。脱脂或脱色柱使用前采用适量的甲醇和水活化，保持湿润状态。

二、水产品中甲基汞检验

水产品中甲基汞容易与组织中硫高度亲和，必须经化学处理才能被溶剂提取。传统的甲基汞测定方法主要是经酸提取巯基棉法、溶剂萃取法、碱消化萃取法等提取分离，采用气相色谱法和原子吸收光度法进行检测。其中酸提取琉基棉法是我国国家标准方法(GB/T5009.17)。近年有机汞的形态分析主要采用联用技术，常见的有气相色谱、高效液相色谱与原子荧光、电感藕合等离子体质谱联用。

(一)酸提取巯基棉法

1．原理样品中的甲基汞经含有Cu²⁺的稀盐酸溶液萃取后，在pH3～3.5条件下用琉基棉吸附，再用盐酸溶液洗脱后，以苯萃取，经气相色谱分离，电子捕获检测器检测。或用碱性氯化亚锡将甲基汞还原成汞蒸气，采用测汞仪进行测定。

2．分析步骤样品加氯化钠研磨后，加入铜盐置换出与组织结合的甲基汞，用盐酸(1+11)萃取后，经离心或过滤，将上清液调至pH 3～3.5，过巯基棉柱，此时有机汞和无机汞均被载留在巯基棉上，用pH 3～3.5的水洗去杂质，然后用盐酸(1+5)选择性地洗脱甲基汞，收集洗脱液。在洗脱液和适量标准使用液分别加入1.0ml苯，振摇，分层后吸出苯液，加无水硫酸钠摇匀，静置，取一定量样液进行气相色谱测定，单点校正法定量。

色谱参考条件为玻璃色谱柱(1.5m×3mm)，内装涂有7％丁二酸乙二醇聚酯(PEGS)，或1.5%OV-17和1.95%QF-1，或涂有5％丁二乙酸二乙二醇AN(DEGS)固定液的Chromosorb WAW DMCS (60～80目)；柱温185℃, Ni63电子捕获检测器：260℃，气化室温度215℃(氘源电子捕获检测器：190℃，气化室温度185℃)；载气：高纯氮，流量为60m1/min。

3．方法说明

(1)巯基棉的制备：棉花是葡萄糖的聚合物，含有很多羟基，在乙酸、乙酸酐和硫酸的存在下，能与硫代乙醇酸缩合，而带上巯基。反应式为：

巯基棉上的巯基在特定的条件下能与多种金属及其化合物结合，在一定的条件下又能被洗脱，因此，琉基棉常用于金属及其化合物的分离、净化和富集。

巯基棉对汞的吸附效率受pH影响很大，在pH 3～3.5范围时，对汞的吸附效率最大。

(2)样品加入等量氯化钠研磨，既有助研磨样品，又可盐析样品中蛋白质，还可提供足够的氯离子，使甲基汞稳定。

(二)半胱氨酸-气相色谱法

样品经含有氯化钠和硫酸铜的酸性混合液研磨成糊状，用苯萃取其中甲基汞，加入半胱氨酸乙酸盐溶液，甲基汞与半胱氨酸结合进入水相，在半胱氨酸溶液中加入HC1使与半胱氨酸结合的甲基汞转化成氯化甲基汞，再用苯萃取后，经气相色谱分离，电子捕获检测器检测，标准曲线法定量。

色谱参考条件为色谱柱：涂有2%OV-17及1.5%QF-1固定液的Chromosorh W AW DMCS(60～80目)；温度：柱温185℃，检测器温度195℃，气化室温度200℃；载气(高纯氮)流速：60m1/min。

(三)溶剂萃取一测汞仪法

在L-抗坏血酸和碘化钾共存下，甲基汞形成碘化甲基汞，能被苯萃取，采用测汞仪检测，根据峰高求出样品中汞的含量。

其中加入的还原剂L-抗坏血酸可以防止生成游离碘而影响甲基汞的萃取，使回收率明显提高。

(四)仪器联用技术

近些年GC-AFS、GC-ICP-MS、HPLC-AFS、HPLC-ICP-MS因其分离能力和灵敏度高，已成为汞形态分析的主要联用技术。

采用气相色谱与光谱或质谱联用技术时，不同形态的汞通常要衍生化，使其变得易挥发而且具有一定的热稳定性。样品常用氢氧化钾-甲醇溶液或四甲基氢氧化铵-甲醇溶液碱解提取，经四乙基硼化钠衍生化，使Hg²⁺与四乙基硼化钠反应生成二乙基汞，甲基汞则反应生成甲基乙基汞，采用气相色谱使不同形态Hg分离，然后经MS或ICP-MS检测，或将分离后不同形态的求转变为元素汞，用原子荧光检测器进行检测。

采用液相色谱分离时，不同形态汞无需衍生化步骤，样品一般用氯化钠和硫酸铜的酸或碱体系，经超声波提取后，调节pH 4～7，加入2-巯基乙醇溶液与无机汞、甲基汞及其他有机汞形成复合物，增大极性差异，便于色谱分离。经微孔有机滤膜过滤，滤液用C₁₈反相色谱柱分离，ICP-MS检测，或色谱柱分离后收集适当的流出液进入原子荧光光谱仪的消解系统，经氧化及紫外消解转化为无机汞进行测定。根据保留时间定性，标准曲线法定量。

相关链接：水产品的理化检验

文章来源：《食品理化检验》

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