一、案例

黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素B1的半数致死量为O.36mg／kg(体重)，属特剧毒的毒物。它的毒性比氰化钾大10倍，比砒霜大68倍。它引起人的中毒主要是损害肝脏，发生肝炎、肝硬化、肝坏死等。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质，其致癌力是奶油黄的900倍，比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍，比3，4一苯并芘大4000倍，它主要诱使动物发生肝癌，也能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的癌症，1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为l类致癌物。黄曲霉毒素主要污染粮油及粮油制品，如花生、花生油、大豆、高梁、玉米、小麦、大米等，也可以广泛污染其他各类食品，如蛋类、乳及乳制品。在各类黄曲霉毒素中，以B1分布最广，毒性最大，致癌性最强，因此食品中黄曲霉毒素含量以黄曲霉素B1为主要指标。

二、选用的国家标准

GB／T 5009．22 2()03食品中黄曲霉毒素B1的测定——薄层色谱法。

三、测定方法

1．取样

试样中污染黄曲霉毒素B₁的霉粒一粒左右可以测定结果。由于有毒霉粒的比例小，且分布不均匀，为避免取样带来的误差，应大量取样，并将该大量试样粉碎，混合均匀，才有可能得到确切能代表一批试样的相对可靠的结果，因此采样应注意以下几点。

①根据规定采取有代表性试样。

②对局部发霉变质的试样检验时，应单独取样。

③每份分析测定用的试样应从大样经粗碎并连续多次用四分法缩减至O.5～1kg，然后全部粉碎。粮食试样全部通过20目筛，混匀。花生试样全部通过l0目筛，混匀。或将好、坏分别测定，再计算其含量。花生油和花生酱等试样不需制备，但取样时应搅拌均匀。必要时，每批试样可采取3份大样作试样制备及分析测定用，以观察所采试样是否具有一定的代表性。

2．提取

(1)玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等。

①甲法 称取20．OOg粉碎过筛试样(面粉、花生酱不需粉碎)，置于250mL具塞锥形瓶中，加30mL正已烷或石油醚和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。振荡30min，静置片刻，以折叠式的快速定性滤纸过滤于分液漏斗中，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。取20．00mL甲醇水溶液(相当于4g试样)置于另一125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层，如出现乳化现象可滴加甲醇促使分层。放出三氯甲烷层，经盛有约10g预先用三氯甲烷润湿的无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于50ml。蒸发皿中，再加5mL三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后取少量洗过滤器，洗液并于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风柜于65℃水浴上通风挥于，然后放在冰盒上冷却2～3min后，准确加入1mL苯乙腈混合液(或将三氯甲烷用浓缩蒸馏器减压吹气蒸干后，准确加入1mL苯一乙腈混合液)。用带橡胶皮头的滴定管的管尖将残渣充分混合，若有苯的结晶析出．将蒸发皿从冰盒上取出．继续溶解、混合，晶体即消失，再用此滴管吸取上清液转移于2mL具塞试管中。

②乙法(限于玉米、大米、小麦及其制品)称取20.OOg粉碎过筛试样于250ml，具塞锥形瓶中，用滴管滴加约6ml。水，使试样润湿，准确加入60ml，三氯甲烷，振荡30min,加12g无水硫酸钠，振摇后，静置30min，用折叠式的快速定性滤纸过滤于lOOmL具塞锥形瓶中。取12ml。滤液(相当于4g试样)于蒸发皿中，在65℃水浴上通风挥干，准确加入1mL苯一乙腈混合液，以下按“甲法”自“用带橡胶皮头的滴定管的管尖将残渣充分混合……”起依法操作。

(2)花生油、香油、菜油等 称取4.OOg试样置于小烧杯中，用20mL正己烷或石油醚将试样移于125mL分液漏斗中。用20ml甲醇水溶液分次洗烧杯，洗液一并移入分液漏斗中，振摇2min，静置分层后，将下层甲醇水溶液移入第二个分液漏斗中，再用5ml。甲醇水溶液重复振摇提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中，在第二个分液漏斗中加入20mL三氯甲烷，以下按“甲法”自“振摇2min，静置分层……”起依法操作。

(3)酱油、醋 称取10.OOg试样于小烧杯中，为防止提取时乳化，加0.4g氯化钠，移入分液漏斗中，用15mL三氯甲烷分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中。以下按“甲法”自“振摇2min，静置分层……”起依法操作，最后加入2.5mL苯乙腈混合液，此溶液每毫升相当于4g试样。

或称取10.OOg试样，置于分液漏斗中，再加12mL甲醇(以酱油体积代替水，故甲醇与水的体积比仍约为55：45)，用20mL。三氯甲烷提取，以下按“甲法”自“振摇2min，静置分层……”起依法操作，最后加入2.5mL。苯一乙腈混合液。此溶液每毫升相当于4g试样。

(4)干酱类(包括豆豉、腐乳制品) 称取20．OOg研磨均匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加入20mL正己烷或石油醚与50mL甲醇水溶液。振荡30min，静置片刻，以折叠式快速定性滤纸过滤，滤液静置分层后，取24mL甲醇水层(相当于8g试样，其中包括8g干酱类本身约含有4mL水的体积在内)置于分液漏斗中，加入20mL三氯甲烷，以下按“甲法”自“振摇2min，静置分层……”起依法操作，最后加入2mL苯乙腈混合液。此溶液每毫升相当于4g试样。

(5)发酵酒类 同(3)处理方法，但不加氯化钠。