1 范围

本标准规定了果蝇伴性隐性致死试验的基本技术要求。

本标准适用于评价受试物的遗传毒性作用。

2 术语和定义

2.1 致死突变

基因组中发生的一种改变，当它表达时，引起携带者死亡。

2.2 隐性突变

只在纯合子或半合子条件下被表达的基因组中的一种改变。

2.3 伴性基因

存在于性染色体(X或Y)上的基因。在此仅指位于X染色体上的基因。

3 试验目的和原理

隐性基因在伴性遗传中具有交叉遗传特征，即雄蝇的X染色体传给F₁代雌蝇,又通过F₁代雌蝇传给F₂代雄蝇。位于X染色体上的隐性基因在F₁代雌蝇为杂合性，不能表达，而能在半合型F₂代雄蝇表现出来。据此,利用眼色性状由X染色体上的基因决定,并与X染色体的遗传相关联的特征来作为观察在X染色体上基因突变的标记,故以野生型雄蝇(红色圆眼，正常蝇)染毒，与Basc(Muller-5)雌蝇(淡杏色棒眼,在两个X染色体上各带一个倒位以防止F₁代把处理过的父系X染色体和母系X染色体互换)交配,如雄蝇经受试物处理后，在X染色体上的基因发生隐性致死，则可通过上述两点遗传规则于F₂代的雄蝇中表现出来,并籍眼色性状为标记来判断试验的结果。即根据孟德尔分类反应产生四种不同表型的F₂代,有隐性致死时在F₂代中没有红色圆眼的雄蝇。

4 仪器和试剂

4.1 仪器

电热恒温干燥箱、生化培养箱、立体解剖显微镜、放大镜、空调机、麻醉瓶、果蝇培养管、试管盘及架、白瓷板、海绵垫、毛笔、海绵塞。

果蝇饲养用具洗净后于120℃干燥消毒2h后备用。

4.2 试剂

乙醚、75%乙醇、丙酮、吐温。

4.3 培养基的制备

4.3.1 蔗糖26g、酵母粉4g,加水150mL。

4.3.2 玉米粉34g、酵母粉4g,加水150mL。

4.3.3 步骤:先将4.3.1所述的培养基成分混合煮沸溶解后，再将4.3.2的成分依次倒入混匀、煮沸，最后加丙酸2mL,搅匀，分装于果蝇培养管内，备用。

5 试验方法

5.1 受试物

受试物应溶解或悬浮于合适的溶媒中，溶媒应为无毒物，不与受试物发生化学反应。首选溶媒为水，不溶于水的受试物可使用植物油(如橄榄油、玉米油等)，不溶于水或油的受试物可使用羧甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或糊状物等,然后在给样前用蔗糖水稀释。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。

5.2 实验动物

黑腹果蝇。雄蝇用3日龄～4日龄的野生型黑腹果蝇(Drosophila MeIanogaster),雌蝇用Basc(Muller-5)品系3日龄～5日龄的处女蝇。观察2d～3d有无卵或早龄幼虫孵出，以检查是否有非处女蝇混入。

5.3 剂量

按常规方法求出果蝇LC₅₀或LD₅₀值。然后按1/2LC₅₀或LD₅₀为高剂量，1/4LD₅₀为中剂量，1/8LD₅₀为低剂量,另设阴性(或溶媒)及阳性［2mmol/L甲基甲烷磺酸酯(MMS)］对照组。如果受试物毒性较小,受试物加入培养基的最大剂量可占培养基的5%。阳性对照物可用甲基磺酸乙酯、甲基磺酸甲酯、N-亚硝基二甲胺。

相关链接：哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试（三）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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