A.1 一般规定

本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 溶解性

几乎不溶于水，部分溶于乙醇，不溶于甘油。

A.2.2 最大吸收峰

样品的正已烷溶液在波长445nm附近有最大吸收峰。

A.2.3 颜色反应

取1滴辣椒油树脂样品，加入2滴～3滴氯仿和1滴硫酸，溶液呈棕色至深蓝色。

A.3 辣椒素含量的测定

A.3.1 方法一(仲裁法)

A.3.1.1 试剂和材料

A.3.1.1.1 甲醇：色谱纯。

A.3.1.1.2 四氢呋喃：色谱纯。

A.3.1.1.3 甲醇-四氢呋喃混合溶剂：体积比为1:1。

A.3.1.1.4 辣椒碱标准品(纯度≥95%)。

A.3.1.1.5 二氢辣椒碱标准品(纯度≥90%)。

A.3.1.1.6 标准储备液：分别精确称取适量辣椒碱标准品和二氢辣椒碱标准品，精确到0.0001g,用甲醇溶解并定容。配成浓度均为1mg/mL的辣椒碱和二氢辣椒碱的混合标准储备液，密封后贮于4℃冰箱中备用。

A.3.1.1.7 标准使用液：分别吸取标准储备液0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL和2.5mL,分别用甲醇定容至25mL,此标准系列浓度为0ug/mL、20ug/mL、40ug/mL、60ug/mL、80ug/mL和100ug/mL,现配现用。

A.3.1.2 仪器和设备

A.3.1.2.1 高效液相色谱仪：配备紫外检测器。

A.3.1.2.2 分析天平(感量0.0001g)。

A.3.1.2.3 分析天平(感量0.001g)。

A.3.1.3 参考色谱条件

A.3.1.3.1 色谱柱：C18,4.6mm×250mm,5um(或其他等效色谱柱)。

A.3.1.3.2 流动相：甲醇-水溶液，体积比为65:35。

A.3.1.3.3 进样量：10uL。

A.3.1.3.4 流速：1mL/min。

A.3.1.3.5 紫外检测波长：280nm。

A.3.1.3.6 柱温箱温度：30℃。

A.3.1.4 分析步骤

A.3.1.4.1 试样液制备

准确称取适量试样(辣椒素含量约1%时称取1.000g,约2%时称取0.500g,以此类推),用甲醇-四氢呋喃混合溶剂溶解并定容至100mL,经0.45um滤膜过滤后备用，此为试样液。

A.3.1.4.2 测定

按A.3.1.3参考色谱条件对试样液和标准使用液分别进行色谱分析。根据标准使用液中辣椒碱和二氢辣椒碱的含量绘制标准曲线，用标准物质色谱峰的保留时间定性，根据辣椒碱、二氢辣椒碱标准曲线及样液中的峰面积定量。

A.3.1.5 结果计算

试样中辣椒碱含量以质量分数w1计，数值以克每千克(g/kg)表示，按公式(A.1)计算：

式中：

c1—由标准曲线查到的辣椒碱含量，单位为微克每毫升(ug/mL);

V—试样定容体积，单位为毫升(mL);

1000—质量换算系数：

m—试样质量，单位为克(g)。

计算结果表示到小数点后三位。

试样中二氢辣椒碱含量以质量分数w2计，数值以克每千克(g/kg)表示，按公式(A.2)计算：

式中：

c2—由标准曲线查到的二氢辣椒碱含量，单位为微克每毫升(ug/mL);

V—试样定容体积，单位为毫升(mL);

1000—质量换算系数；

m—样品质量，单位为克(g)。

计算结果表示到小数点后三位。

试样中辣椒素含量以质量分数w3计，数值以%表示，按公式(A.3)计算：

式中：

w1—试样中辣椒碱含量，单位为克每千克(g/kg);

w2—试样中二氢辣椒碱含量，单位为克每千克(g/kg);

9—辣椒碱与二氢辣椒碱折算为辣椒素含量的系数。

实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(二)》

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