A.1 一般规定

本标准除另有规定外，所用试剂均为分析纯，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，应按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备，试验用水应符合GB/T6682的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 鉴别试验

A.2.1 最大吸收峰

取试样0.1g，用乙醇-盐酸溶液(A.3.1.2)溶解并稀释至100mL，此试样液在525nm±5nm范围内有最大吸收峰。

A.2.2 颜色反应

取试样0.1g，溶于50mL水中，溶液呈红色～紫红色，在溶液中加入氢氧化钠溶液(4.3g氢氧化钠溶于100mL水中)，溶液颜色转为蓝色或深绿色。

A.3 色价的测定

A.3.1 试剂和材料

A.3.1.1 乙醇。

A.3.1.2 乙醇-盐酸溶液：取4mL盐酸溶液(1+4)，置于1000mL容量瓶中，用40%乙醇溶液稀释定容至刻度，摇匀。

A.3.2 仪器和设备

分光光度计。

A.3.3 分析步骤

称取试样0.1g，精确至0.0001g，用乙醇-盐酸溶液溶解并定容至100mL，摇匀，然后吸取10mL，转移至100mL容量瓶中，加乙醇-盐酸溶液定容至刻度，摇匀。取此试样液置于1cm比色皿中，以乙醇-盐酸溶液做空白对照，用分光光度计在525nm±5nm的最大吸收波长处测定吸光度(吸光度应控制在0.2～0.8之间，否则应调整试样液浓度，再重新测定吸光度)。

A.3.4 结果计算

色价以被测试样液浓度为1%、用1cm比色皿、在525mm±5nm的最大吸收波长处测得的吸光度(525±5)nm计，按式(A.1)计算：

式中：

A——实测试样液的吸光度；

c——被测试样液的浓度，单位为克每毫升(g/mL)；

100——浓度换算系数。

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。

A.4 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的测定

A.4.1 试剂和材料

A.4.1.1 乙腈：色谱纯。

A.4.1.2 盐酸。

A.4.1.3 甲酸。

A.4.1.4 矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品：纯度≥98%。

A.4.1.5 甲醇溶液：50%。色谱纯甲醇和水等体积比混合均匀。

A.4.1.6 盐酸溶液：1+499。

A.4.2 仪器和设备

高效液相色谱仪，配紫外检测器。

A.4.3 参考色谱条件

A.4.3.1 色谱柱：耐酸型C₁₈色谱柱，4.6mm(内径)×250mm(长)，粒度5μm。或其他等效色谱柱。

A.4.3.2 流动相：乙腈+甲酸+水=(15+1+100)。

A.4.3.3 柱温：25℃。

A.4.3.4 流速：1.0mL/min。

A.4.3.5 进样量：20uL。

A.4.3.6 检测波长：515nm。

A.4.4 分析步骤

A.4.4.1 对照溶液的制备

称取适量矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照品，精确至0.0001g，用甲醇溶液溶解后配制成浓度约为0.06mg/mL的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对照溶液，冷冻保存。测定前，此对照溶液用盐酸溶液稀释3倍后，备用。

A.4.4.2 试样溶液的制备

称取试样0.1g，精确至0.0001g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶液100mL，超声处理10min，用微孔滤膜(0.45um)滤过，冷冻保存。测定前，此试样溶液用盐酸溶液稀释3倍后，备用。

A.4.4.3 系统适用性试验

在A.4.3参考色谱条件下，多次进样，对对照溶液进行色谱分析，分离度R应大于1.5，理论塔板数按矢车菊素-3-O-葡萄糖苷计算应不低于2000。

A.4.4.4 测定

在A.4.3参考色谱条件下，分别对对照溶液和试样溶液进行色谱分析。记录试样溶液色谱图与对照溶液色谱图中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷峰面积值。

A.4.5 结果计算

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的质量分数w按式(A.2)计算：

式中：

A——试样溶液色谱图中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的峰面积值；

c——对照溶液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；

3——稀释倍数；

100——溶液体积，单位为毫升(mL)；

A₂——对照溶液色谱图中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的峰面积值；

m——试样的质量，单位为毫克(mg)。

试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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