A.1 一般规定

本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品在没有注明其他规定时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。

A.2 喹黄的测定

A.2.1 分光光度比色法

A.2.1.1 方法提要

将喹啉黄试样用磷酸盐缓冲溶液(pH≈7)溶解，稀释定容后，在最大吸收波长处(415nm)，测其吸光度计算其含量。

A.2.1.2 试剂和材料

磷酸盐缓冲溶液：pH≈7.称取0.68g磷酸二氢钾，加29.1mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至100mL。

A.2.1.3 仪器和设备

A.2.1.3.1 分光光度计。

A.2.1.3.2 比色皿：10mm。

A.2.1.4 分析步骤

A.2.1.4.1 试样溶液的配制

称取约0.25g喹啉黄试样(精确至0.0001g)，溶于适量磷酸盐缓冲溶液中，移入1000mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀。吸取10mL，移入250mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀，备用。

A.2.1.4.2 测定

将喹啉黄试样溶液置于10mm比色皿中，同在最大吸收波长处(415nm)用分光光度计测定其吸光度，用磷酸盐缓冲溶液作参比液。

A.2.1.5 结果计算

喹啉黄的质量分数w₁，按式(A.1)计算：

式中：

A——试样溶液的吸光度值；

25——试样溶液的稀释倍数；

1000——试样溶液定容的体积，单位为毫升(mL)；

865——在磷酸盐缓冲溶液中415nm波长处的百分吸光系数；

m₁——试样的质量，单位为克(g)；

100——换算系数。

计算结果表示到小数点后两位。

平行测定结果的绝对差值不大于1.0%，取其算术平均值作为测定结果。

A.2.2 高效液相色谱法

A.2.2.1 方法提要

本方法用于由2-(2-喹啉基)-1,3-茚二酮磺化而制得的喹啉黄，用峰面积归一化法测定2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮二磺酸二钠盐、2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮单磺酸钠盐和2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮三磺酸三钠盐的含量。

A.2.2.2 试剂和材料

A.2.2.2.1 水：GB/T602中规定的二级水。

A.2.2.2.2 甲醇。

A.2.2.2.3 氢氧化钠溶液：1mol/L。

A.2.2.2.4 乙酸溶液：1mol/L。

A.2.2.2.5 乙酸钠缓冲溶液：pH≈4.6。氢氧化钠溶液、乙酸溶液与水的体积比=510：35。

A.2.2.3 仪器和设备

高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器，配有梯度洗脱功能。

A.2.2.4 参考色谱条件

A.2.2.4.1 色谱柱：C₁₈色谱柱，250mm×4.6mm，粒径5um；或其他等效的色谱柱。

A.2.2.4.2 流动相

流动相A：乙酸钠缓冲溶液与水体积比=1：10，流动相B：甲醇与流动相A的体积比=80∶20。

A.2.2.4.3 流动相流速：1.0mL/min。

A.2.2.4.4 检测波长：254nm。

A.2.2.4.5 进样量：20uL。

A.2.2.4.6 梯度洗脱：见表A.1梯度洗脱程序。

表A.1梯度洗脱程序

A.2.2.5 分析步骤

A.2.2.5.1 试样溶液的配制

称取约0.5g喹啉黄试样(精确至0.0001g)，加流动相A溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。

A.2.2.5.2 测定

在A.2.2.4 参考色谱条件下，对试样溶液进行色谱分析，确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰的保留时间及峰面积Ai，用面积归一化法定量。

A.2.2.6 结果计算

2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮二磺酸二钠盐、2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮单磺酸钠盐和2-(2-喹啉基)-茚满基-1,3-二酮三磺酸三钠盐的质量分数wi，按式(A.2)计算：

式中：

A_i——试样溶液色谱图中i组分的峰面积；

∑_Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积之和。

计算结果表示到小数点后两位。

平行测定结果的绝对差值不大于1.0%，取其算术平均值作为测定结果。

相关链接：食品添加剂喹啉黄

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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