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(1)外标法
定量时,在薄层上点样品溶液时随行点已知浓度的对照品溶液。外标法可分为外标一点法和外标二点法。当工作曲线是通过原点的直线时,选用一种浓度的对照品溶液为外标一点法;当工作曲线不通过原点时,选用高低两种浓度的对照品溶液随样品溶液点在同一薄层上为外标二点法。
以上方法的校正不仅可以对一个对照品斑点,还可以对2个或4个同样量的对照品斑点的测得值进行平均后计算。
外标法的工作曲线示意图。此外还可在同一薄层上点不同浓度的对照品溶液,然后将所得斑点的面积值与浓度得回归方程,根据回归方程计算样品中待测成分的含量。
(2)内标法
本法与外标法的主要区别在于用内标法时面积累计值为被测成分和内标物斑点面积值之比,在样品溶液中加人一种在样品溶液中不存在的、但性质与被测物质类似且又与样品中被测成分很易分离的纯化合物。
但内标物的选择比较困难,因此在薄层定量时很少选用内标法。内标法也分为一点法及二点法,选择哪种方法的原则与外标法相同。
因为组分的含量与斑点的面积成正比,对于含n个组分的混合物中组分的含量应服从下式。
组分1的含量等于它的斑点面积,在总斑点面积中所占的百分比。当然只有在被分析各组分的性质(分子量、吸收系数)差别较小以及斑点面积在线性范围内的情况下才适用。
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