3.2.2.1 适用范围

适用于蜂蜜中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量液相色谱-串联质谱测定。方法检出限：链霉素、双氢链霉素和卡那霉素的检出限均为5.0μg/kg。

3.2.2.2方法原理

蜂蜜试样中的抗生素用磷酸盐缓冲溶液提取，用Oasis HLB固相萃取柱和羧酸型固相萃取柱或相当者净化。液相色谱-串联质谱仪(ESI+)检测，外标法定量。

3.2.2.3试剂和材料

甲醇、乙腈：色谱纯。甲酸、磷酸氢二钾(K₂HPO₄)、庚烷磺酸钠(C₇H₁₅NaO₃·SH₂O)：优级纯。

0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液：pH=8.0。称取34.8g磷酸氢二钾，用水溶解，定容至1L，用磷酸调节pH=8.0。

0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液：称取2.20g庚烷磺酸钠，用水溶解，定容至1L。

SPE洗脱溶液：取4mL甲酸，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液定容至100mL。

20%甲醇溶液(1+3，v/v)：取25mL甲醇，用水定容至100mL。

标准物质纯度均≥98%。

1.0mg/mL标准储备溶液：称取适量的链霉素、双氢链霉素和卡那霉素标准物质，分别用0.3%乙酸水溶液溶解并配制成1.0mg/mL的标准储备溶液。避光保存于-18℃冰柜中。

0.1ug/mL混合标准溶液：吸取适量链霉素、双氢链霉素和卡那霉素标准储备溶液，用0.3%乙酸水稀释

0.1ug/mL的混合标准溶液，避光保存于-18℃冰柜中。

Oasis HLB固相萃取柱(60mg，3mL)或相当者：使用前依次用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。

羧酸型固相萃取柱(500mg，3mL)或相当者：使用前依次用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。

滤膜：0.2um。

3.2.2.4仪器和设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。分析天平：感量0.1mg和0.01g。液体混匀器。固相萃取装置。均质器。真空泵：真空度应达到80kPa。微量注射器：25μL，100μL。pH计：测量精度±0.02pH单位。三角瓶：200mL。贮液器：50mL。

3.2.2.5样品前处理

(1)试样制备

实验样品混合均匀，分出0.5kg作为试样。试样置于-18℃冰柜，避光保存。

(2)待测样品溶液的制备

称取蜂蜜样品10g(精确到0.01g)，置于200mL三角瓶中，加入20mL 0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液，涡旋混合5min后，全部倒入下接Oasis HLB固相萃取柱的贮液器中，此Oasis HLB固相萃取柱下面用适配器接羧酸型固相萃取柱，在固相萃取装置上使样液以小于2mL/min的流速依次通过OasisHLB固相萃取柱和羧酸型固相萃取柱，待样液全部通过两支固相萃取柱后，依次用10mL水和10 mL 20%甲醇溶液洗涤两支固相萃取柱，弃去全部流出液和Oasis HLB固相萃取柱。减压抽干羧酸型固相萃取柱30min。用2mL SPE洗脱液洗脱至5mL刻度离心管中，用SPE洗脱液定容至2.0mL，混匀后过0.2um滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。

(3)基质混合标准校准溶液的制备

称取五个阴性蜂蜜样品10g(精确到0.01g)，分别置于200mL三角瓶加入适量混合标准溶液，制成链霉素、双氢链霉素和卡那霉素含量均为2.5μgkg、5.0ugkg、10.0ug/kg、50.0ug/kg和100.0ug/kg的基质标准溶液。其余按上述步骤操作完成。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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