4.2.1.6测定

(1)液相色谱条件

1)氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定：

色谱柱：SUPELCODiscoveryC₁₈，5um，150mm×2.1mm(内径)或相当者；柱温：40℃；流动相：甲醇-水(2+3，v/v)；流速：0.30mL/min；进样量：20μL。

2)氟苯尼考胺测定：

色谱柱：Intersil C₈-3，5um，150mm×4.6mm(内径)或相当者；柱温：40℃；流动相：甲醇-水(4+1，v/v)；流速：0.30mL/min；进样量：10uL。

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：负离子扫描(氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定)；正离子扫描(氟苯尼考胺测定)；检测方式：多反应选择离子检测(MRM)；电喷雾电压(IS)：-4200V(氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定)；4500V(氟苯尼考胺测定)；雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；辅助气温度(TEM)：600℃；定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表4-7。

表4-7氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、氘代氯霉素(d₅-氯霉素)和氟苯尼考胺的质谱参数

(3)定性测定.

每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待检测物质和内标物的保留时间之比，也就是相对保留时间，与标准溶液中对应的相对保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1-5规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

(4)定量测定

氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考测定以内标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质标准工作溶液进样，以标准溶液中被测组分峰面积和氘代氯霉素(d₅-氯霉素)峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度与氘代氯霉素(d₅-氯霉素)浓度的比值为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

氟苯尼考胺测定以外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质标准工作溶液进样，以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质的多反应监测色谱图见图4-3，氘代氯霉素的多反应监测色谱图见图4-4，氟苯尼考胺标准物质的多反应监测色谱图见图4-5。

图4-3 氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考标准物质的多反应监测(MRM)色谱图

图4-4 氘代氯霉素(d5-氯霉素)标准物质的多反应监测(MRM)色谱图

图4-5 氟苯尼考胺标准物质的多反应监测(MRM)色谱图

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文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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