2)放射免疫分析法(radioimmunoassay， RIA)

RIA技术是使用以放射性同位素(如¹²⁵I、³²P、³H等)作标记的抗原或抗体，利用同位素标记的抗原和未标记的抗原与抗体发生竞争抑制反应，用γ射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ射线或β射线的放射性强度，来测定抗体或抗原含量的技术。近年来有研究人员采用该技术对动物组织中的CAP残留进行了检测。尽管该方法灵敏度非常高(RIA通常为10^-9 g、10^-12 g，甚至10^-15 g)，应用范围广，但进行RIA需使用昂贵的计数器，且存在放射线辐射和污染等问题，因此在兽药残留检测领域的应用和发展受到了一定的限制，并逐步为其他免疫分析方法所取代。

Armold等开发了RIA法测定鸡蛋、牛奶、动物肌肉中的CAP残留。当采用高特异性的羊抗血清时，除了酰基侧链的代谢物外，交叉反应并不显著，TAP并不反应。净化的目的是除去脂质，脱脂牛奶可以直接稀释检测。该方法LOD为0.2ug/kg，lug/kg以上的CAP能被准确定量，回收率为85%，与GC-ECD的结果相比没有显著差异。徐美奕等采用RIA法测定了对虾中CAP残留量，方法LOD为0.15×10^-12，可作为水产品中CAP残留量的有效检测手段。黄晓蓉等建立了RIA受体免疫分析方法快速筛检烤鳗中CAP残留，灵敏度高，LOD可达0.3μg/kg。

利用抗生素功能基与微生物细胞结合部位的结合反应特性，集RIA、ELISA、生物发光技术、液体闪烁技术为一体进行抗生素残留的快速检测，亦得到较广泛研究和应用。美国食品与药品管理局(FDA)推荐使用的CHARM II快速筛检方法，样品处理简单，检测时间短，基本满足实际样品检测的需要。McMullen等应用此方法检测蜂蜜中的CAP残留，LOD为0.3ug/kg。倪梅林等也用CHARM II快速筛检虾仁中CAP残留量，精密度为5.5%，LOQ能达到0.1μg/kg。

3)荧光免疫分析(fluoroimmunoassay， FIA)

FIA是利用免疫反应的高度特异性和标记示踪物的高度灵敏性相结合而建立的一类非放射性的新兴检测技术。近年来以其特出的优点逐渐为人们所重视。郭艳宏等采用反相微乳技术合成了荧光稀土铕二氧化硅纳米颗粒，用其与CAP单克隆抗体结合制备CAPs残留物免疫检测探针，对牛奶中CAP及其琥珀酸盐同步检测，简便快速，30min内得出结果。与TAP、庆大霉素、磺胺二甲基嘧啶之间无交叉反应，特异性好，未发现非特异性吸附问题。Li等利用单克隆抗体建立了时间分辨-荧光免疫分析(TR-FIA)方法检测水产品中的CAP。方法LOD为0.04ng/g，LOQ为0.15ng/g；批内CV小于10%，批间CV小于13.3%；平均回收率在83.7%～109.6%之间，CV为8.3%～1.5%；与ELISA方法相比具有很好的相关性。Zhang等采用Eu³⁺标记抗CAP单克隆抗体，开发了一种新型的双标记TR-FIA方法检测猪组织中的CAP。方法LOD为0.06ng/g，在添加浓度0.1～5ng/g范围，猪肉中的回收率为102%～121%。分析结果与ELISA和GC-MS方法的相关性为0.92～0.98。Gasilova等建立了一种荧光偏振免疫分析(FPIA)方法用于检测牛奶中的CAP。选择双抗体和荧光素标记抗原的最佳配对，对使用饱和硫酸铵溶液处理牛奶样品进行了优化，对测试过程的分析特性进行了确定。整个分析过程不超过10min，方法LOD为20ug/kg。

相关链接：氯霉素类药残留测定——免疫分析法（一）

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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