8.2.4.1 适用范围

适用于牛肌肉、肝、肾中a-群勃龙、β-群勃龙残留量的液相色谱-串联质谱测定。检出限均为2μg/kg。

8.2.4.2 方法原理

试样在pH=5.0条件下加酶水解，用乙酸乙酯提取群勃龙残留，经凝胶色谱净化仪(GPC)和硅胶柱净化，高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

8.2.4.3 试剂和材料

甲醇、乙酸、乙腈：色谱纯；乙酸乙酯、环已烷、丙酮、正己烷：分析纯；β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯(β-glucuronidase/aryl sulfatase)：100000unit/mL。

乙酸乙酯+环己烷(50+50，v/v)、丙酮+正己烷(10+90，v/v)、丙酮+正己烷(30+70，v/v)。

乙酸钠缓冲液：0.02mol/L，pH=5.0。称取无水乙酸钠0.82g溶于500mL水中，用乙酸调节pH=5.0。

a-群勃龙、β-群勃龙标准物质：纯度≥98%。

标准储备溶液：分别精确称取a-群勃龙、β-群勃龙标准物质各0.0100g，用乙腈溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备溶液。此溶液-18℃冷冻保存，可使用6个月。

混合标准工作溶液：取标准储备溶液各5mL至50mL容量瓶中，用乙腈定容，配制成混合标准工作溶液，浓度为10μg/mL，此溶液-18℃冷冻保存，可使用3个月。

硅胶固相萃取柱：500mg，3mL；使用前用5mL丙酮+正己烷预处理，保持柱体湿润。

8.2.4.4 仪器和设备

高效液相色谱仪配有紫外检测器。高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。凝胶色谱仪。均质器。旋转蒸发仪。旋涡混合器。离心机：最大转速5000r/min。氮气浓缩仪。恒温水浴摇床。

8.2.4.5 样品前处理

(1)试样制备

牛肌肉、肝、肾组织用组织捣碎机绞碎，分出0.5kg作为试样备用。制备好的试样置于-18℃冰柜中避光保存。

(2)试样的称取

称取5个阴性样品，每个样品为5g(精确到0.01g)，置于50mL具塞离心管中，再分别加入不同量混合标准工作溶液，使各被测组分的浓度均为2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL。

(3)提取

向上述盛有5个阴性样品的50mL具塞离心管中，加入5mL乙酸钠缓冲溶液和20μL β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯，摇匀后盖好塞子置于恒温水浴摇床上，37℃振荡水解过夜(≥5h)。待水解液冷却至室温后，加入20mL乙酸乙酯，在均质器上以10000r/min的速度均质提取1min后，3000r/min离心10min，将上清液过滤至鸡心瓶中。再用20mL乙酸乙酯重复提取--次，合并上清液于同一鸡心瓶中。

(4)净化

1)凝胶色谱仪条件

净化柱：22g S-X3 Bio-Beads填料，200～400目，200mm×25mm(i.d.)，或相当者；流动相：乙酸乙酯+环已烷(50+50，v/v)，流速：5.0mL/min；定量环：5mL；净化程序：0～10.5min弃去洗脱液，10.5～15.5min收集洗脱液，15.5～18min弃去洗脱液。

2)GPC及硅胶固相萃取净化

将提取液在45℃下蒸至近干，用乙酸乙酯+环已烷定容至10mL的玻璃试管中，按GPC条件净化。净化后将收集的洗脱液蒸干，用3 mL丙酮+正己烷漩涡振荡溶解残渣，将溶液转移到预洗过的硅胶柱上的贮液器中，然后再用3 mL丙酮+正已烷(10+90， v/v) 溶解一次， 将合并的溶解液过硅胶柱，接着用3 mL丙酮+正己烷(10+90， v/v) 淋洗硅胶柱，最后用5 mL丙酮+正己烷洗脱分析物并收集。洗脱液用氮气浓缩仪在60℃水浴中吹干，用1 mL流动相漩涡振荡溶解，过0.45 um滤膜，供高效液相色谱和高效液相色谱-串联质谱测定。

(5)试样溶液的制备

称取待测样品5g (精确到0.01g)于50 mL带塞离心管中，按上述提取净化步骤操作。

(6)空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g (精确到0.01g)于50 mL带塞离心管中，按上述提取净化步骤操作。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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