18.2.1.7 分析条件的选择

(1)提取条件的优化

1)提取溶剂选择

对比了用乙酸乙酯，乙腈作为提取溶剂在碱性环境下提取，和用甲醇作为提取溶剂在酸性环境下提取的回收率。具体实验内容如下：

用甲醇作为提取溶剂：量取10mL牛乳样品于50mL聚丙烯离心管中，滴加5mol/L盐酸调至pH约为4.6。加入10mL甲醇，涡旋混匀1min，置于50℃水浴15min，超声波提取10min，以4000r/min离心10min。移取上清液用滤纸过滤，弃去初滤液，取5mL滤液过经过活化的强阳离子交换固相萃取柱(SCX柱)净化。用5mL纯水淋洗净化柱，最后用4mL甲醇洗脱盐酸左旋咪唑，收集的流出液中加入1：1氨水2滴，于50℃水浴上氮气吹干。加2mL流动相溶解残渣，0.22um膜过滤，进样分析。

用乙腈作为提取溶剂：量取10mL牛乳样品于50mL聚丙烯离心管中，加入10mol/L氢氧化钠0.1mL，氯化钠约5g和乙腈10mL，旋紧盖子，涡旋混匀1min，振荡10min，以4000r/min离心10min。移取上层乙腈5mL于另一个50mL聚丙烯离心管中，50℃水浴上氮气吹干。加入正己烷10mL和0.05mol/L盐酸10mL，旋紧盖子，振荡10min，以2000r/min的转速离心5min。收集下层盐酸溶液，用于SCX柱SPE净化。

用乙酸乙酯作为提取溶剂:量取10mL牛乳样品于50mL聚丙烯离心管中，加入10mol/L氢氧化钠0.1mL，氯化钠约5g和乙酸乙酯10mL，旋紧盖子，涡旋混匀1min，振荡10min，以4000r/min的转速离心10min。移取上层乙腈5mL于另一个50mL聚丙烯离心管中，加入0.2mol/L盐酸10mL，旋紧盖子，振荡10min，以2000r/min的转速离心5min。收集下层盐酸溶液5mL，用于SCX柱SPE净化。

按照上述三种提取方法测定添加浓度为10μg/L的牛奶样品中左旋咪唑回收率，每种方法做3个平行测定。对比试验结果(见表18-4)表明，用乙酸乙酯作为提取溶剂，基质背景相对干净，基线噪音低，对提高检测灵敏度效果明显，提取效率最高，回收率最为稳定，故选用乙酸乙酯作为提取溶剂。

表18-4 三种提取方法的回收率(%)比较(添加浓度为10μg/L)

2) 提取方法的选择

对比了以乙酸乙酯作为提取溶剂，用超声波和振荡方法提取不同时间的回收率。在加入饱和氯化钠的条件下，涡旋混匀后，用超声波提取10min，乙酸乙酯与水相分层快，获得稳定、满意的回收率。

3) 氢氧化钠溶液的浓度和加入体积的优化

左旋咪唑经常以盐酸左旋咪唑的形式存在，用氢氧化钠将样品中的盐酸左旋咪唑转化为左旋咪唑，有利于提高其在有机溶剂中的提取效率。用1mol/L氢氧化钠1mL和10mol/L氢氧化钠0.1mL做碱化牛奶样品的对比实验。结果表明，在加入氢氧化钠总量相同的前提下，加入小体积大浓度的氢氧化钠溶液，样品的乳化程度较低，有利于提高左旋咪唑的提取效率。故选用10mol/L氢氧化钠碱化样品。然后，分别加入10mol/L氢氧化钠0.1mL、0.2mL和0.5mL，对比了氢氧化钠溶液加入体积对，结果表明，加入0.1mL和加入0.2mL对回收率无明显影响，加入0.5mL的回收率则略有下降趋势，故选择氢氧化钠溶液的加入体积为0.2mL。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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