19.2.2.1 适用范围

适用于牛肉、牛奶、猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、兔肉、兔肝中硫脲嘧啶、甲巯咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巯基苯并咪唑残留的液相色谱-串联质谱测定。本方法的测定低限为：硫脲嘧啶、甲巯咪唑50μg/kg；甲基硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑30μg/kg；丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶5μg/kg。

19.2.2.2 方法原理

采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫脲嘧啶、甲巯咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巯基苯并咪唑，提取液经液液分配和HLB固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱-串联质谱定性检测，内标法定量。

19.2.2.3 试剂和材料

甲醇、甲酸、乙酸乙酯、正已烷、乙腈：高效液相色谱级；磷酸、巯基乙醇、二水乙二胺四乙酸二钠：分析纯；无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。

0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液：准确称取37.2g二水乙二胺四乙酸二钠，用水溶解并定容至1L；乙腈饱和的正己烷：量取正己烷80mL于100mL分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腈层；0.1%甲酸水溶液：准确量取1mL甲酸，用水定容至1L；0.0025mol/L磷酸：准确量取0.2mL磷酸，用水定容至1L；溶解液：90mL 0.1%甲酸水溶液中加入10mL甲醇。

标准物质：硫脲嘧啶(2-thiouracil，TU)、甲巯咪唑(methimazole，TAP)、甲基硫氧嘧啶(methyl thiouracil，MTU)、丙硫氧嘧啶(propyl thiouracil，PTU)、苯基硫氧嘧啶(phenyl thiouracil，PhTU)、2-巯基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole，MBI)，纯度均≥99%。

内标物质：5，6-二甲基硫氧嘧啶(5，6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU)，纯度≥99%。

标准储备溶液：准确称取适量标准品(精确至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，-18℃冷冻避光保存，有效期3个月。

混合中间标准溶液：准确移取各1mL标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合中间标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。

混合标准工作溶液：根据需要用甲醇把混合中间标准溶液稀释成适合浓度的混合标准工作溶液，现用现配。

内标标准储备液：准确称取适量5，6-二甲基硫氧嘧啶(精确至0.0001g)，用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的内标标准储备溶液，-18℃冷冻避光保存，有效期3个月。

内标标准工作溶液：准确移取0.1mL内标标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为1μg/mL的内标标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。

氮气：纯度≥999%。氩气：纯度9999%。

HLB固相萃取柱：200mg，6mL，或相当者。

微孔滤膜：0.20um，有机相。

19.2.2.4 仪器和设备

液相色谱/串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)；组织捣碎机；分析天平：感量0.0001g，0.01g；均质器：10000r/min；振荡器；离心机：10000r/min；氮吹仪；旋涡混合器；超声波水浴；减压浓缩仪；梨形瓶：100mL；具塞塑料离心管：50mL；刻度试管：10mL；移液枪：5mL，1mL，200μL；分液漏斗：50mL。

19.2.2.5 样品前处理

(1) 试样制备

a.肌肉和内脏：从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于-18℃冷冻避光保存。

b.奶：从原始样品取出有代表性样品约500g，充分搅拌混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。

c.蛋：从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。

注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

(2)提取

称取约5g试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，依次加入150μL内标标准工作液、50uL巯基乙醇、30μL 0.1mol/L的乙二胺四乙酸二钠溶液和适量无水硫酸钠，吸去样品中的水分，再加入20mL乙酸乙酯，用均质器以10000r/min均质1min后，振荡提取20min，再以4000r/min离心5min，收集上清液于100mL梨形瓶中。残渣用20mL乙酸乙酯再提取一次，合并上清液，在40℃水浴中减压浓缩至近干。残留物用10mL乙腈溶解，并转移至50mL分液漏斗中，用30mL乙腈饱和后的正己烷分三次液液分配，去除油脂。收集乙腈层，在40℃水浴中减压浓缩至近干，残留物用10mL 0.0025mol/L磷酸溶解，超声波水浴助溶5min后，待净化。

(3)净化

HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水预淋洗后，转入10mL样品提取液。先用5mL水进行淋洗，弃去；再用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在40℃下用N2吹干。残留物用1mL溶解液溶解，涡动1min后，过0.2um微孔滤膜，供仪器检测。

(4) 混合基质标准溶液的制备

称取5份约5g阴性试样(精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分别加入混合中间标准溶液或混合标准工作溶液，再加入150uL内标标准工作液，余下操作按上述提取步骤操作。

相关链接：牛甲状腺和牛肉中5种硫脲嘧啶类药物残留量测定线性范围和测定低限

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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