液相色谱-质谱联用仪是将液相色谱仪与质谱仪通过一定接口耦合到一起的分析仪器，它既能用于定性分析又能用于定量检测，在有机化学、生物化学、石油化工、环境保护、食品安全、农业科学、生命科学、医药卫生等领域都得到了广泛的应用。为了保证液相色谱-质谱联用仪测量结果的准确统一，需要对液相色谱-质谱联用仪进行定期校准。目前，我国没有液相色谱-质谱联用仪检定规程或校准规范，笔者通过查阅大量技术资料和多次实验，提出了以下液相色谱-质谱联用仪校准方法，供探讨。

一、校准条件

1.实验室环境要求

(1)仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性气体或试剂。

(2)实验室温度:15℃～30℃；相对湿度:≤70%。

2.试剂

标准物质:利血平:10.0ng/mL，基体为流动相；氯霉素:10.0ng/mL，基体为流动相。调谐液:仪器厂家推荐的物质。

二、校准项目和校准方法

1.分辨力的校准

仪器稳定后，执行自动调谐命令。注入调谐液，直到调谐通过，打印调谐报告，考查其中3～6个主要离子峰的半峰宽，以半峰宽的最大值作为仪器的分辨力W1/2。

2.质量准确性的校准

按照调谐条件注入调谐液，仪器调谐通过后，记录其中3～6个主要离子的实测质量数。根据式(1)计算质量准确性，以绝对值最大的ΔM来评价质量准确性结果

式中:——第i个离子3次测量平均值，u；Mi理论——第i个离子理论值，u。

3.质量范围的校准

按照调谐条件，注入符合校准要求的调谐液，进行调谐和校准。在设定的质荷比范围内(如m/z为50～2000)，选择SCAN模式进行全范围扫描，以分辨力和质量准确性均满足计量性能要求的最低和最高质荷比范围作为质量范围。

4.信噪比的校准

以调谐确定的最佳参数作为校准参数。选择C18或性能相当的色谱柱。

ESI正离子:注入10pg利血平，选择SIM模式(或MRM模式)，提取m/z=609特征离子(或其m/z=195的子离子)，根据式(2)计算信噪比:

S/N=H/H噪声 (2)

式中:H——提取离子的峰高；H噪声——基线噪声。

ESI负离子:注入100pg氯霉素，选择SIM模式(或MRM模式)，提取m/z=321特征离子(或其m/z=152的子离子)，根据式(2)计算信噪比。

APCI正离子:注入10pg利血平，选择SIM模式(或MRM模式)，提取m/z=609特征离子(或其m/z=195的子离子)，根据式(2)计算信噪比。

5.整机定量及定性重复性

按照信噪比的校准条件重复测量6次，分别记录质量色谱图中相应的峰面积和保留时间，根据式(3)，以峰面积的相对标准偏差计算定量重复性，以保留时间的相对标准偏差计算定性重复性。

式中:RSD——相对标准偏差，%；xi——第i次测量峰面积或保留时间；x——6次测量峰面积或保留时间的算术平均值。

三、几点说明

1.主要技术指标

以常用分辨力、质量范围、质量准确性、信噪比和整机性能重复性五大类基本技术指标来衡量液相色谱-质谱联用仪的性能优劣，其中分辨力、质量范围、灵敏度(以信噪比反映)是最重要的3个技术指标。

质量范围是质谱仪非常重要的指标，其主要反映质谱仪所能测量的最大质荷比m/z，也决定可测量样品的分子量。分辨力是仪器对不同质量离子分离和对相同质量离子聚集两种能力的综合表征，是极其重要的指标。分辨力越高越好，分辨力提高可以减少前处理、提高灵敏度、增强方法可靠性。灵敏度反映仪器的检测能力。同一检测量在相同测定条件下，通常是信噪比越高表明仪器的灵敏度越高。仪器整机性能的重复性可以反映仪器泵系统、溶剂系统、进样系统等性能的稳定性和可靠性。

2.校准用标准物质

(1)调谐液的确定

在“标准物质”一栏中，只给出了调谐液的名称，并没有给出具体的物质，而采用了“仪器厂家推荐的物质”的表述形式。这是因为:在众多的液相色谱-质谱联用仪生产厂家中，采用的调谐液并没有统一，且调谐液的组成及比例也各异，各公司推荐了适合本公司设备的调谐液，如热电公司采用聚酪氨酸-1.3.6，Waters公司和AB公司采用碘化铯钠，安捷伦公司采用商品化的复合物(成分不详)。据咨询有关厂家，不同种类的调谐液，在不同厂家设备上可能存在无法通用的问题，否则可能损害液相色谱-质谱联用仪。鉴于此，没有规定具体的调谐液，在校准过程中，只要能满足校准性能指标要求，灵活采用调谐液的种类并不会影响校准结果。

(2)标准物质的选择

经调研，目前不同厂家的液相色谱-质谱联用仪灵敏度测定(以信噪比反映)所用标准物质基本集中在利血平和氯霉素这两种。所以，选定利血平和氯霉素作为信噪比测定用标准物质。校准所用的利血平和氯霉素，均应是有证标准物质。

3)标准物质用量的表述

在信噪比测定中，采用了“注入10pg利血平”和“注入100pg氯霉素”的表述，而没有统一采用“注入10.0μg/L利血平或氯霉素1μL或10μL”的形式，是考虑到当前液相色谱-质谱联用仪配套的液相色谱仪，有的是常规普通液相色谱仪，有的是“超高效/高速/快速”液相色谱仪，由于性能上的差异，进样体积相差较大，如超高效液相色谱仪进样1μL即可满足响应需要，而常规普通液相色谱仪则需10μL或更高。因此，应选用注入标准物质的质量，以适应不同型号和配置的液相色谱-质谱联用仪，增加灵活性和拓展实用性。