一、目的和要求

(1)了解总磷对水环境的影响。

(2）掌握钼酸按分光光度法测定总磷的原理和方法。

二、原理

总磷是造成水体富营养化污染的主要原因，同时也是水质评价的主要指标之一，准确测定其在水体中的含量，对于正确评价水质现状、预测水质发展趋势、防治水污染、保持水环境的健康循环都有着很重要的现实意义。

在中性条件下用过硫酸钾（或硝酸一高氯酸）使试样消解，将所含磷全部氧化为正磷酸盐。在酸性介质中，正磷酸盐与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色的络合物，于分光光度计波长700nm处测量吸光度。

方法适用于各种水样中总磷含量为0. 01-0. 6mg/L的测定。

三、仪器与试剂

(1) 医用手提式蒸汽消毒器或一般压力锅（(1. 1一1. 4kg/cm2 )。

(2) 50mL具塞（磨口）刻度管。

(3）分光光度计。

(4）硫酸（H2SO4），密度为1. 84g/mL。

(5）硝酸（HNO3 )，密度为1. 4g/mL。

(6）高氯酸（HC1O4），优级纯，密度为1. 68g/mL。

(7）硫酸（H2SO4),1:l。

(8) 硫酸，约cH₂SO₄=0. 5mol/L。将27mL硫酸（密度为1. 84g/mL)加入到973mL水中。

(9) 氢氧化钠（NaOH), lmol/L溶液。将40g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL。

(10) 氢氧化钠（NaOH), 6mol/L溶液。将240g氢氧化钠溶于水并稀释至1000mL。

(11）过硫酸钾，50g/L溶液。将5g过硫酸钾〔K2 S2O8）溶于水，并稀释至l00mL。

(12）抗坏血酸（C₆ H₈ O₆) ,100g/L溶液。溶解l0g抗坏血酸于水中，并稀释至100mL。此溶液储于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。如不变色可长时间使用。

(13) 钼酸盐溶液。溶解13g钼酸铵[(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O]于100mL水中。溶解0. 35g酒石酸锑钾［KSbC₄ H4O7·H2O]于l00mL水中。在不断搅拌下，把钼酸铵溶液缓缓加到300mL硫酸（1：1)中，加酒石酸锑钾溶液并混合均匀。

此溶液储存于棕色试剂瓶中，低温可保存2个月。

(14) 浊度一色度补偿液。混合2体积硫酸（1：1)和1体积抗坏血酸溶液。当天使用当天配制。

(15) 磷标准储备溶液。称取（(0.2197±0. 001) g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾（KH₂PO₄ )，用水溶解后转移至l000mL容量瓶中，加入大约800mL水、5mL硫酸（1：1)用水稀释至标线并混匀。1. 00mL此标准溶液含50. 0μg磷。

本溶液在玻璃瓶中可储存至少6个月。

(16) 磷标准使用溶液。将10. 0mL磷标准溶液转移至250mL容量瓶中，用水稀释至标线并混匀。1. 00mL此标准溶液含2. 0μg磷。当天使用当天配制。

(17) l0g/L酚酞溶液。0. 5g酚酞溶于50mL 95％乙醇中。

四、实验步骤

1．采样和样品

取500mL水样后加入1mL硫酸（密度为1. 84g/mL)调节样品的pH，使之低于或等于1，或不加任何试剂低温保存。

取25mL样品于具塞刻度管中。取时应仔细摇匀，以得到溶解部分和悬浮部分均具有代表性的试样。如样品中含磷浓度较高，试样体积可以减少。

2．样品消解

(1) 过硫酸钾消解。水样中的有机物用过硫酸钾氧化不能完全破坏时，可用此法消解。向试样中加4mL过硫酸钾，将具塞刻度管的盖塞紧后，用一小块布和线将玻璃塞扎紧（或用其他方法固定），放在大烧杯中置于高压蒸汽消毒器中加热，待压力达1. lkg/cm2，相应温度为120℃时，保持30min后停止加热。待压力表读数降至零后，取出放冷，然后用水稀释至标线。

(2) 硝酸一高氯酸消解。取25mL试样于锥形瓶中，加数粒玻璃珠，加2mL硝酸在电热板上加热浓缩至l0mL。冷却后加5mL硝酸，再加热浓缩至l 0mL，放冷。加3mL高氯酸，加热至高氯酸冒白烟，此时可在锥形瓶上加小漏斗或调节电热板温度，使消解液在锥形瓶内壁保持回流状态，直至剩下3-4mL，放冷。加水l0mL，加1滴酚酞指示剂。滴加氢氧化钠溶液（先用6mo1/L溶液，后用lmol/L溶液）至刚呈微红色，再滴加0. 5mol/L硫酸溶液使微红色刚好褪去，充分混匀。移至50mL具塞刻度管中，用水稀释至标线。

3．发色

分别向各份消解液中加入1mL抗坏血酸溶液混匀，30s后加2mL铂酸盐溶液充分混匀。

4．工作曲线的绘制

取7支具塞刻度管，分别加入0mL、0. 50mL、1. 00mL、3. 00mL、5. 00mL、10. 0mL、15. 0mL磷酸盐标准溶液。加水至25mL，然后按测定步骤进行处理。以水作参比，测定吸光度。扣除空白实验的吸光度后，和对应的磷的含量绘制工作曲线。

5．分光光度测定

室温下放置15min后，使用光程为30mm比色皿，在700nm波长下，以水作参比，测定吸光度。扣除空白实验的吸光度后，从工作曲线上查得磷的含量。

五、数据处理

总磷含量以c(mg/L)表示，按下式计算：

c(mg/L）=m/V

式中：m——样测得含磷量，μg ；

V一一测定用试样的体积，mL。

六、注意事项

(1) 用硝酸一高氯酸消解需要在通风橱中进行；高氯酸和有机物的混合物经加热易发生危险，需将试样先用硝酸消解，再加人硝酸一高氯酸进行消解；绝不能把消解的试样蒸干；如消解后有残渣，用滤纸过滤于具塞刻度管中，并用水充分清洗锥形瓶及滤纸，一并移到具塞刻度管中。

(2）如果试样中含有浊度或色度时，需配制一个空白试样（消解后用水稀释至标线），然后向空白试样中加人3mL浊度一色度补偿液，但不加抗坏血酸溶液和钥酸盐溶液。然后从试样的吸光度中扣除空白试样的吸光度。

(3) 水样中砷大于2mg/L时干扰测定，用硫代硫酸钠去除；硫化物大于2mg/L时干扰测定，通氮气去除；铬大于50mg/L时干扰测定，用亚硫酸钠去除。

(4）如果显色时室温低于13℃，可在20-30℃水浴上显色15min即可。