1．方法的适用范围

1)范围：氧化铝是一种多孔的粒状物质。可在3个pH范围（碱性、中性、酸性）应用于柱色谱法中。它可用于从不同化学极性的干扰化合物中分离出待测物。

2）一般应用。

①碱性（B) pH (9-10)：用途：碱性和中性化合物，对于碱、醇类、烃类、甾族化合物类、生物碱类、天然颜料等是稳定的。缺点：可引起聚合、缩合和脱水反应；不能用丙酮或乙酸乙酷作为洗脱液。

②中性（N)：用途：醛类、酮类、醌类、酯类、内酯类、配糖物。缺点：比碱性形式活性小很多。

③酸性（A) pH (4-5)：用途：酸性颜料（天然的和合成的）、强酸类（在不同情况下对中性和碱性氧化铝有化学吸附）。

④活性等级：酸性、碱性或中性氧化铝根据Brockmann标准，通过向第I级中（在400-450℃加热至不再失水来制备）加水可以制备成不同的活性等级（I一V)。

Brockmann标准要求：

a．加入水量（重量％）：0、3、6、10、15;

b．活性等级：I、II、III、Ⅳ、V;

c. RF（对氨基偶氮苯）：0.0、0.13、0.25、0.45、0.55。

3)特殊应用。本法包括净化含有酞酸酷类和亚硝胺类的样品提取物的指导。对于用氧化铝柱净化石油废物，参见方法氧化铝柱净化和分离石油废物方法部分。

2．方法摘要

用所需量的吸附剂装填柱。上部装填吸水剂，然后负载待分析的样品。待测物的洗脱用合适的溶剂以实现，使干扰化合物留于柱上，然后浓缩洗脱液。

3．干扰及消除

①在使用此方法之前，对欲测定的化合物应作试剂空白。在将此法应用于实际样品之前，干扰量必须低于方法检测限。

②除本法中所述之外的其它更多的方法对试剂纯化可能是需要的。

4．仪器和设备

①色谱柱：300mm×l0mm内径，底部有硬质玻璃棉和聚四氟乙烯活塞。

注意：烧结的玻璃圆盘在通过严重污染的提取物之后是很难去污的。可购买无烧结圆盘柱，用一个硬质玻璃棉小垫来保护吸附剂。在用吸附剂填充柱之前，先用50m l丙酮，然后用50ml的洗脱溶剂预洗玻璃棉垫。

②烧杯：500ml。

③试剂瓶：500m1。

④马弗炉。

⑤Snyder柱：三球常量。

⑥Snyder柱：二球微量。

⑦沸石。溶剂提取过的，大约10/40目（碳化硅或同等物）。

⑧水浴。加热用的，带同心圆圈盖。可控温度（±5℃ )。水浴应在通风橱中使用。

⑨小瓶。玻璃制，2 ml容量，具聚四氟乙烯衬里的螺旋盖。

10.锥形烧瓶：50和250ml。

5．试剂

1）硫酸钠（ACS):粒状，无水（在浅盘中于400℃加热4h予以纯化）。

2）洗脱溶剂。

①二乙醚：农药级或相当规格。

a．必须无过氧化物，用EM Quant检验条。

b．清除过氧化物所推荐的方法配有检验条。净化之后，必须在每升醚中加入20m1乙醇保存。

②甲醇、戊烷、己烷、二氯甲烷：农药等级或相当规格。

3)氧化铝。

①酞酸酯提取液的净化：中性氧化铝，活性为Super I。为使用作准备，将100g的氧化铝放入500ml烧杯中，并在400℃加热大约16h。在加热后，转入500m1试剂瓶中。密封并冷却至室温。当冷却时，加3ml试剂水。摇荡或转动10min使其充分混合，令其放置至少2h。使瓶紧密地封闭。

②亚硝胺提取液的净化：碱性氧化铝，活性为Super I。为使用作准备，将l00g的氧化铝放入一个500ml试剂瓶中并加2m1试剂水，摇荡或转动10min使其充分混合，令其放置至少2h。在使用之前，制备应均匀。使瓶紧密地封闭以确保原来的活性。

4）试剂水。试剂水定义为在欲测定化合物的方法检测限内检测不到干扰物的水。

7．步骤

（1） 酞酸酯类

①在净化之前，将样品提取液的体积减少至2m1。萃取溶剂必须为己烷。

②将l0g氧化铝放入色谱柱中装实氧化铝；加lcm的无水硫酸钠至顶部。

③用40m1己烷预先洗提柱。所有的洗脱速度应约为2ml/min，弃去洗脱液，并在硫酸钠层刚要暴露于空气之前，定量的转移2ml样品提取液至柱上，使用另外的2m1乙烷使全部转移。在硫酸钠层刚好暴露于空气之前，加35ml的己烷继续洗提柱子。弃去此己烷洗脱液。

④然后，用140ml 20％乙醚己烷溶液（体积比）洗脱柱子，流入一个装配一支l0ml浓缩管的500m1 K-D瓶中。浓缩收集到的级分。不需要更换溶剂。调整净化的提取液的体积至所需的体积并分析。在此级分中洗脱的化合物如下：双（2-乙基己基）酞酸酯；丁基苄苯基酞酯；二-正-丁基酞酸酯；二乙基酞酸酯；二甲基酞酸酯；二-正-辛基酞酸酯。

(2)亚硝胺类

①在净化之前，将样品提取液减少至2m1。

②二苯胺若存在于原始样品的提取液中，必须将其从亚硝胺类中分离出来，以便应用此方法测定N-亚硝基二苯胺。

③将12g氧化铝制剂装入l0mm内径色谱柱中。轻敲柱以填实氧化铝，并加1 -2cm的无水硫酸钠至柱顶。

④用l0ml乙醚一戊烷(3：7，体积比）预洗脱柱。弃去洗脱液（约2ml )，并在硫酸钠层刚好暴露于空气之前，定量转移2ml样品提取液至柱上，用另外2m1戊烷完成定量转移。

⑤在硫酸钠层刚好暴露于空气之前，加70m1乙醚一戊烷(3：7)，弃去最先的l0ml洗脱液，收集以后的洗脱液于装有l0ml浓缩管的500ml K-D瓶中。这级分含有N-亚硝基-二-正丙胺。

⑥然后，用60ml乙醚-戊烷（1：1，体积比）洗脱柱，收集洗脱液于第二个装有l0ml浓缩管的500ml K-D瓶中。加15m1甲醇至K-D瓶中。本级分将含N-亚硝基二甲胺、绝大部分N-亚硝基-二-正丙胺和存在的任何二苯胺。

⑦浓缩这两部分，但使用戊烷来预湿Snyder柱，当仪器冷却后，移开Snyder柱并用1-2ml的戊烷冲洗瓶和它的下部接头流入浓缩管中。调整最终体积至合适的测定方法所需之体积。分析此部分。

8．质量控制

①分析者在应用此法于实际样品之前，应证明欲测定的化合物已被定量地回收。

②对于应用此法进行净化的样品提取液，有关的质量控制样品也必须通过此净化方法进行处理。

9．方法性能