4样品分析方法确证技术要求

4. 1特异性

对于色谱法，至少要考察6个不同个体来源的空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图，反映分析方法的特异性。对于质谱法，则应着重考察分析过程 中的介质效应。

4. 2标准曲线和定量范围

根据所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法获得标准曲线,提供标准曲线的线性方程和 相关系数。标准曲线高低浓度范围为定量范围，必须用至少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相 同的生物介质制备标准曲线，定量范围要能覆盖全部待测样品浓度。建立标准曲线时，应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。

4.3精密度与准确度

一般要求选择3个〜5个浓度样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量限附近，其浓度在定量限的3倍以内;高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测 定5个样品，为获得批间精密度应至少连续测定3个分析批。精密度用质控样品的批内和批间相对标准差（RSD）表示，RSD一般应小于15%,在最低检测限附近RSD应小于20%。准确度一般应在85%〜 115%范围内，在最低检测限附近应在80%〜120%范围内。

4.4最低检测限

一般要求残留分析方法的最低检测限（LOD）满足:MRL>0. 5 mg/kg时,最低检测限为0.1 mg/kg；当 MRL 在 0. 5 mg/ kg~O. 05 mg/kg 时,最低检测限为 0.1 mg/ kg〜0. 02 mg/ kg；当 MRL<0. 05 mg/ kg 时，最低检测限为0.5 MRL。

4.5回收率

一般要求考查高、中、低3个浓度的提取回收率，其结果可重现。

4.6方法学质控

对于未知浓度样品的测定应在生物样品分析方法确证完成以后开始。每个未知浓度样品一般 测定一次，必要时可进行复测。每个分析批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并随行测定高、 中、低3个浓度的质控样品。质控样品测定结果的偏差一般小于20%，每个浓度质控样品至少双样本，并应均匀分布在未知样品测试顺序中。当一个分析批中未知浓度样品数目较多时，应增加各浓度质控样品数，使质控样品数大于未知浓度样品总数的5%,质控样品测定的偏差一般应小于15%, 低浓度点偏差一般应小于20%,最多允许1/3不在同一浓度的质控样品结果超限。如质控样品测 定结果不符合上述要求，则该分析批样品测试结果作废。浓度高于定量上限的样品，应采用相应的 空白介质稀释后重新测定。整个分析过程应当遵从预先制定的试验室标准操作程序以及良好实验室操作原则。

4. 7微生物学和免疫学分析方法确证技术要求

上述分析方法确证的很多指标和原则也适用于微生物学或免疫学分析，但在方法确证中应考虑到它们的一些特殊之处。微生物学或免疫学分析的标准曲线本质上是非线性的,所以应采用比化学分析更多的浓度点来建立标准曲线。

5药物代谢动力学曲线的拟合、模型的确定及参数估算

5.1药时曲线的拟合及模型确定

根据药物性质和动物特点选择合适的数据处理软件,可采用Win Nonlin、Kinetica、3p87 (3p97)、PK- BP-N1、BAPP、MCPKP、DNS等;注明软件名称、版本和来源。根据不同时间点所对应的血液等组织样品 药物浓度,作药时曲线图，釆用最小二乘法拟合出药物代谢动力学方程，根据血药浓度与时间的函数关系 确定所属的模型。

5.2药物代谢动力学参数的估算

根据试验中测得的受试动物的血药浓度-时间数据，求得受试药物的主要代谢动力学参数。对于静脉 注射给药的药物，应提供消除半衰期t_1/2、表观分布容积Vd、血药浓度-时间曲线下面积AUC、清除率CL 等参数值;对于血管外给药的药物，除提供上述参数外，还应提供峰浓度Cmax、达峰时间Tmax等参数值。

文章来源：《水产品兽药残留限量及监测方法查询手册》

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