本评定通式，按色谱法中的外标法，列出被测物质量分数的测量不确定度的评定通式。

一、测定方法

GB 10501-2000《多菌灵原药》标准多菌灵含量指标：优等品：98.0％；合格品：95.0％,其测定方法

试验方法

1.抽样

按GB/T 1605-1979(1989)中“原粉采样”方法进行。用随机数表法确定抽样的包装件；最终抽样量应不小于250g。

2.鉴别试验

高效液相色谱法—本鉴别试验可与多菌灵含量的测定同时进行。在相同的色谱操作条件下，试样溶液某一色谱峰的保留时间与标样溶液中多菌灵色谱峰的保留时间其相对差值应在1.5％以内。

薄层色谱法—试样溶液经展开得到的主斑点与同时展开的标样溶液的斑点其Rf值应一致。展开条件：流动相，φ苯:丙酮:冰乙酸）=70:30:5；固定相，硅胶GF 254（薄层层析用）。

3.多菌灵含量的测定

3.1方法提要

试样用冰乙酸溶解，以甲醇＋水＋氨水为流动相，使用以Nova-PakC18为填料的不锈钢柱和紫外检测器（282 nm)，对试样中的多菌灵进行反相高效液相色谱分离，外标法定量。

3.2试荆和溶液

甲醇：色谱级；

水：新蒸二次蒸馏水；

冰乙酸；

氨水；

甲醇溶液：φ甲醇：水）＝60：40；

多菌灵标样：已知含量≥99.0％。

3.3仪器

高效液相色谱仪：具有紫外可变波长检测器；

色谱数据处理机；

色谱柱：250 mm×3.9 mm(id）不锈钢柱，内装Nova-PakC18,5 um填充物；

过滤器：滤膜孔径约0.45um;

微量进样器：50 uL;

定量进样管：5 uL;

超声波清洗器。

3.4高效液相色谱操作条件

流动相：φ(甲醇：水：氨水）=60：40：0.13，经滤膜过滤，并进行脱气；

流量：0.8 mL/min;

柱温：室温（温差变化应不大于2℃）；

检测波长：282 nm;

进样体积：5 uL;

保留时间：多菌灵5.0 min。

上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点，对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。典型的多菌灵原药高效液相色谱图见图1。

3．5测定步骤

3.5.1标样溶液的制备

称取多菌灵标样0.1 g（精确至0.0002 g),置于100 ML客量瓶中，加入10 mL冰乙酸，振摇使之溶解，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。

3.5.2试样溶液的制备

称取含多菌灵0.1 g的试样（精确至0.0002 g) ,置于100 ML容量瓶中，加10 mL冰乙酸，振摇，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。

3.5.3测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针多菌灵峰面积相对变化小于1.0％后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

3.6计算

试样中多菌灵的质量分数W1(％）按式（1)计算：

式中：

A₁—标样溶液中，多菌灵峰面积的平均值；

A₂—试样溶液中，多菌灵峰面积的平均值；

m_l—标样的质量，g；

m₂—试样的质量，g；

w—标样中多菌灵的质量分数，％。

3.7允许差

两次平行测定结果之差，应不大于1.2%，取其算术平均值作为测定结果。

注：由于标准发布年代较早，将标准公式按新格式改写。