平衡盐溶液（BSS)是从Ringer生理盐水发展起来的，主要由无机盐和葡萄糖组成。BSS中的无机离子是细胞生命的必要成分，在维持渗透压、缓冲作用和调节溶液pH方面也起着重要作用。另外，Ca²⁺、Mg²⁺能为酶系统的活化提供条件，也是细胞膜的重要组成成分。葡萄糖等为细胞代谢提供能量。作为核酸分子的合成也需要S,P等作为基质。BSS内还含有少量的酚磺酞（酚红），作为pH变化的指示剂，溶液变酸性时呈黄色，变碱性时呈紫红色，中性时呈桃红色，以此来观察和判定培养液pH的变化。

在细胞培养中，BSS主要有如下用途：①作为配制培养基的基础溶液：如用Hanks液配制水解乳蛋白培养基等；②配制各种试液：如配“胰酶”消化液；③用于洗涤组织和细胞。目前最常用的BSS是Hanks液、Earle液和PBS等。

（一）BSS的配制要求

1．要防止钙的沉淀BSS配制时应将其中的CaCl₂单独配制，并将平衡盐溶液配成浓缩液，使其在稀释前不让Ca²⁺与P0₄^2-和C0₃^2-接触，以免产生不溶解的CaP0₄和CaCO₃。避免产生CaC0₃的方法是将NaHC0₃单独配制，使用时现加。

2．要有良好的缓冲作用Hanks液和Earle液都需一定量的C02平衡。因此应将瓶盖（橡皮塞）盖紧，以防瓶中CO2逃逸，致使溶液pH增高。pH调节液单独灭菌时，亦应将瓶盖塞紧，暂时不用的可冻存，否则NaHC0₃受热分解为NaOH和C0₂，失去其调节pH之功能。

（二）Hanks平衡盐溶液（Hanks balanced salt solutions, HBSS )

为了便于保存和减少有关成分的化学反应，此液可配成20倍浓缩液（20×) ,10倍浓缩液（10×)和5倍浓缩液（5×)的储存液（母液）。现以l0×为例，将其配制方法介绍如下：

1.l0×母液配制法

甲液：取450ml三蒸水依次溶解下列试剂

NaCl        80g

KCl        4g

MgS0₄·7H₂0        2g

CaCl₂        1.4g（含2H20者1.85g)

待完全溶解后，补足三蒸水至500m1。

乙液：取450m1三蒸水依次溶解下列试剂

Na₂HP0₄        0.6g（含12H₂O者1.52g)

KH₂P04        0.6g

葡萄糖       l0g

0.4%酚磺酞       50ml

待完全溶解后，补足三蒸水至500ml。

2. Hanks使用液配制法取上述甲、乙液等量用三蒸水稀释10倍，即成使用液。用前高压灭菌。例如配制1000m1 Hanks使用液，则取三蒸水900 ml加入甲液50m1、乙液50m1混匀，用67.6kPa(115℃）高压灭菌15分钟。临用时，用7.5% NaHC0₃调至所需pH。

3．无钙镁Hanks (calcium and magnesium free Hanks buffered saline，CMF-Hanks）液，也称D-Hanks液。D-Hanks与Hanks液的一个主要区别是前者不含钙和镁，常用于配制胰蛋白酶等溶液；而Hanks液仅含0.35g/L NaHC0₃，不能用于5% C0₂的环境，若放于C0₂孵箱中，溶液将迅速变酸，使用时应注意D-Hanks与Hanks液的这些区别。

【附】0.4%酚磺酞溶液：为配制上述Hanks液，应先配好0.4%酚磺酞溶液待用。配制方法如下：称取0.4g酚磺酞，置玻璃研钵中细研，逐渐加入0.1 mol/L NaOH边滴边研至酚磺酞完全溶解，要记好加NaOH的量，共加至11.28m1为止，将研好的酚磺酞液用吸管移入烧瓶中加三蒸水88.72m1,55kPa(113℃）高压灭菌15分钟。

（三）Earle液

一般认为Earle液比Hanks液缓冲能力强，但Earle液在不用橡皮塞的容器中需加C0₂平衡（利用5% C0₂气体平衡），其配方如下：

1．母液A(10×)配法

NaCl       68.0g

KC1       4.0g

MgS0₄·7H₂0       2.0g

NaH₂P0₄·H₂O       1.44g

葡萄糖10.0g

双蒸水800ml

酚磺酞(0.4%） l00ml

将两者混合即为l0×母液A(900ml)。

2．母液B(l0×）配法

CaC1₂       2.0g

双蒸水l00ml

将母液A和B分别经67.6kPa(115℃) 15分钟灭菌，待冷后，无菌操作将B液徐徐倒入A液中，并分装，置4℃保存（称Earle贮存液）。

3. 7.5% NaHCO37.5% NaHCO₃液的配制是称取NaHC03 15g ,溶于200ml蒸馏水中，高压灭菌后分装，注意用橡皮塞封住瓶口存放。

4．使用液配制法取1份Earle贮存液加9份双蒸水稀释后，塞紧瓶塞，写明标记，经67.6kPa(115℃) 15分钟灭菌，置室温或4℃保存备用。临用时在每l00ml的Earle使用液中加入无菌的7.5% NaHC0₃ 2.9ml(也相当于调至所需pH)。 Earle平衡盐溶液含较高的NaH-C0₃(2.2g/L)，适合于5% C0₂的培养条件。

（四）PBS液

可配成含0.85%NaCl,pH 7.2的PBS（简称pH 7.2 PBS)。

1. PBS贮存液（10×）配法

NaCl       8.5g

KCl       0.2g

Na₂HP0₄·12H₂0       2.85g（或Na₂HP0₄·2H₂0 1.13g)

KH₂P0₄       0.27g

溶于100ml双蒸水中。

2. PBS应用液配法取贮存液 50ml加双蒸水450m1即成，经103kPa(121.3℃) 15分钟灭菌，置室温或4℃保存备用。

除上述三种常用的平衡盐溶液外，尚有其他几种次常用的平衡盐溶液，如低钙镁的Dul-becc。液和无钙镁的D-Hanks液（或CMF-Hanks）等。可用于配制消化液和洗涤细胞（可防止抑制酶活性和致细胞凝聚等）。其成分见表1-5，配制方法可参照上述几种平衡盐溶液的方法进行。