培养基可分为天然培养基和合成培养基。天然培养基使用最早，也最有效，主要来自动物体液或从组织分离提取制备的，其营养成分较高，但成分复杂，个体差异较大，来源也有一定的限制。合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成的，具有一定的组成，是一种较理想的培养基。但对动物细胞来说，它只能维持细胞的生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充天然培养基，即两者混合在一起使用，效果更好。合成培养基的出现，促进了组织培养的发展，避免了生物差异的影响，细胞生长健康透明，延长了体外存活的时间，价廉易制取。

培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。

（一）天然培养基

天然培养基（natural media）包括：血清、血浆、组织浸出液等。使用最普遍的是血清，以牛血清最常用。血清由于含有多种细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质。与合成培养基合用，常见使用浓度为5％～20%，市场有产品出售。血浆之类组织提取液应用较少，需自己制备。

1．鸡血浆的制备血浆含有纤维蛋白原和一些营养成分，与鸡胚胎汁混合会发生凝固，构成组织细胞生长的环境，有利于细胞向三维空间生长。因制备血浆后不另作无菌处理，所以全过程必须在严格无菌条件下进行。

制备过程如下：先选择一年左右体大、健壮的雄鸡，采血前一天禁食，多喂水。将鸡固定在手术架上，取仰卧位，从鸡翅取血；展开鸡翅，拔掉翅根局部羽毛，碘酊、乙醇棉球消毒。用20m1无菌注射器，吸取少许肝素液(20mg/100m1生理盐水配制），湿润注射器内壁后，用16号针头刺入静脉，吸血10ml，注入离心管中，摇匀后分离血浆，3000r/min离心10分钟，吸出上清血浆，分装小瓶，-20℃冻存备用。

2．血清血清为天然培养基中最为重要和在细胞培养中最常使用的天然培养基。血清中含有许多能维持细胞生长增殖不可缺少的成分，如血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素和无机物等营养成分。

种类：分人血清和动物血清两大类。细胞培养中最常用的是动物血清，来自牛、马、兔等动物，其中牛血清比马血清用得更广泛。牛血清分为胎牛血清（fetal bovine serum, FBS或fetal calf serum, FCS）和小牛血清（calf serum, CS）两种。FBS是经剖腹从母牛子宫中取出的胎牛中分离到的血清，价格贵；CS是从刚出生但尚未哺乳的小牛中分离到的血清。目前市售的牛血清质量不一，购买之前应通过细胞培养进行选择试验，观察细胞生长增殖与否。也可以用克隆形成率和细胞生长曲线作为指标加以鉴定，而且要经过检菌试验选择无支原体和无纳米细菌污染的牛血清。

3．水解乳蛋白水解乳蛋白（lactalbumin hydrolysate, LH）是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，也是天然培养基。使用时配制成0.5％的溶液，按80％～85％乳白蛋白液+15％～20％的CS或40％～45％乳白蛋白液+40％合成培养基+15％～20% CS配制。

配制方法如下：

(1)称取0.5 g水解乳蛋白粉末于烧杯中，先用灭菌的Hanks液调成糊状，然后补加Hanks液至100m1，不断搅拌，使其充分溶解。置室温中1～2小时，并不时搅拌数次。

(2)滤纸过滤于另瓶中，加盖后经115℃高压蒸气（68kPa）灭菌10分钟。于4℃冰箱保存备用。

4．鼠尾胶原胶原是细胞生长的良好基质，尤其对组织块和细胞的固定附着，改善生长表面的特性有很好的作用。胶原主要用于组织块黏着培养及不易贴壁细胞的附着，并改善生长表面的性质以适合细胞的生长。胶原的种类有来自大鼠尾腱，豚鼠或牛的真皮，牛眼的水晶体等。大鼠尾胶原是实验室常用的，其制备方法如下：

(1)切取尾腱：因为胶原黏度较大，难于滤过除菌，故整个操作均应保持无菌操作。取大白鼠一只，剪断鼠尾，置75％乙醇中浸泡30分钟，于无菌条件下将鼠尾切成1.5cm左右的小段，剥去毛皮，抽出尾腱置平皿中。

(2）浸出胶原：剪碎尾腱，浸入无菌的0.1％醋酸溶液150ml中，置4℃冰箱浸出48小时，中间应不时作振摇。

(3）分离：4000r/min离心30分钟，吸取上清液，经115℃ (68kPa）高压灭菌10分钟后分装，-20℃保存备用。

(4)使用方法：取少许胶原涂于无菌培养瓶皿培养面的内壁上，不宜太厚，以倾斜瓶皿时不流动为准。向培养瓶内通以氨气后封上瓶盖，作用30分钟，待胶原凝固，然后用无菌生理盐水冲洗，晾干后即可使用。