细胞复苏指按一定的复温速度将冻存的细胞恢复到细胞生存常温。快速常温状态使曾冻存过的细胞形态结构保持正常，细胞功能即可恢复。应用快速融化的手段，使冻存的胞外结晶在很短时间内融化，避免缓慢融化使水分渗入，形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

【材料】

1．完全培养液（生长液）；

2．器具恒温水浴箱、快速离心机、无菌离心管、培养瓶等。

【方法】

1．复温从液氮中取出冻存管，立即放入37～40℃水浴中，快速摇晃直至完全融化，应在1分钟内完成复温过程。

2．去除冻存液无菌打开冻存管，将细胞冻存液移入无菌的离心管内，加入约5 ml生长液，轻轻摇匀，将细胞悬液经1000r/min离心5分钟，弃上清液。

3．复苏培养离心后细胞沉淀用少量生长液悬浮，转入培养瓶中补齐培养液，即配成所需要的细胞浓度，置37℃,5% CO₂孵箱培养。或无菌操作打开冻存管，将细胞悬液吸到培养瓶中补足生长液后，置37℃ 5% C0₂孵箱中培养，4～6小时后，待细胞贴壁后轻轻倒掉含冻存液的生长液，换生长液后继续培养。

【结果】

复苏后的细胞应保持该细胞冻存前的特性和活力，活细胞率应在90％以上。

【注意事项】

1．复苏过程要迅速，冻存细胞应在1分钟内完全融化。复温速度太慢，会造成细胞损伤。细胞冻存液一旦融化后，也要尽快离心去除冻存液，防止其对细胞产生毒性。

2．复苏过程中应戴手套和护目镜。使用玻璃安瓶作冻存管时，如出现火焰封口不严，冻存时可能涌入液氮，当解冻时冻存管内的气温急剧上升，可导致冻存管爆破，伤及实验人员，最好用多层纱布先将冻存管包好再放入温水中融化。

细胞的运输

培养细胞的交流、购买和送检等已成为生命科学研究中的重要环节，交流细胞需根据保存方式和运输时间采用适当的运输方法。交换细胞时应注意该细胞的生物学性状和培养特性，特别是建立细胞系（株）时间短的细胞，如在运送过程中稍有差错或得到的细胞培养环境与原细胞稍有变化，就有可能使细胞培养失败。运送细胞的方法有两种，即充液法和冻存法。前者适于距离较近的实验室间的运送；后者需利用特殊容器，内装有液氮或干冰（固态C0₂)，封存细胞冻存管。此法保存效果好，适于距离远的运送，为争取时间最好用空运。

1．充液法运输

(1)选用生长性状良好的细胞，当细胞贴壁长至1/2瓶底或接近连接成片时，去掉培养液，加入新鲜培养液至培养瓶颈部（保留少量空气），拧紧瓶盖。然后乙醇消毒瓶盖并用胶带将瓶口密封，瓶周围用棉花包裹，作防震防压处理，运送过程要注意保温。

(2）送达目的地后，可将多余的培养液无菌移液至另一瓶内保存，以备近期换液用，这样做可保证近期内仍使用原实验室的培养液。细胞培养瓶留下适量的培养液继续在37℃,5% C0₂孵箱内培养，次日或待细胞长满瓶底时进行传代培养。交流的细胞落户于新实验室的初始，可使用一段原实验室的培养液，就是让细胞适应新环境能有一个过渡阶段。

2．冰冻法运输

(1)可用制式液氮罐运输或使用装有干冰的泡沫塑料盒内，冻存管封存在该箱内可保存3天以上。塑料箱的容积不小于300mm×300mm×300mm，塑料盒的四壁厚度约为50mm，这样的容器内至少可放入5kg干冰，要迅速将细胞冻存管从液氮中取出转入干冰中，否则细胞将会以10～20℃/min的速度升温，而且绝不能让细胞温度高于-50℃。用液氮罐法运输细胞，将细胞冻存管放入制式的运送液氮罐中进行运输，在液氮罐搬运过程中，要防止液氮外漏。

(2）送达目的地的细胞冻存管，打开包装后即可按常规复苏细胞。