细胞同步化法是用物理或化学的手段使这些在时相上参差不齐的细胞在某一时刻同时进入细胞周期的某一阶段，从而可以收集到一定数量的某一时相的细胞，供研究使用。细胞停止在细胞周期的某一时相，包括选择同步化和诱导同步化，而诱导同步化是使细胞同步化于细胞周期特定时期的基本方法。细胞同步化法有多种，而在选择方法前应考虑是分析细胞周期的哪一期，使细胞同步化达到什么水平，以及实验所需要的细胞数是多少等几个因素。

细胞同步化（synchronization of cell)是使处于细胞周期不同阶段的细胞，经自然或人工选择诱导共同进入周期某一特定阶段的过程，前者称自然同步化，后者称人工同步化。同步生长的细胞群具有形态和生长一致的特点，为研究细胞生长与细胞代谢、细胞周期的调控、DNA的复制、有丝分裂、细胞分化与细胞死亡等许多问题提供极好的研究对象。体外培养的细胞，一般来说均呈快速生长状态，生命活动周期是不同步的，处于细胞周期不同阶段的细胞形态、生化特点也有所不同，对外界的需求和反应各有差异，只有少数细胞进行有丝分裂。目前同步化一般采用药物抑制法，温度休克法、营养饥饿法、离心淘汰法、流式细胞分选法等。已成功的细胞同步化规则只适用于少数几种细胞。同步化的要求是：①使细胞完全停止在细胞周期的某一点；②细胞经各种方法处理后，能够完全恢复；③恢复后细胞能协同进入同步的细胞周期。

一、使细胞同步化在G_o/G₁期（血清饥饿法）

血清饥饿法和异亮氨酸剥夺法是两种最常用的使细胞处于G₀/G₁期同步化的方法，前者可使细胞群体在血清撤除后24～48小时产生反应，使细胞进入G₀期状态，需掌握最佳的血清撤除量及血清撤除时间。但有些细胞种类不适宜血清饥饿法，因此法会将这些细胞永久地停留在G₀期，或者不能停留在G₀/G₁期，或者会引发细胞凋亡。后者是撤除培养液中一种必需氨基酸—异亮氨酸，可获得大量的G₀期细胞，使细胞进入G_o/G₁期状态。同样，并非所有的细胞都会对该同步化过程有反应。

【材料】

1．培养细胞悬浮培养细胞（如REF-52）或贴壁单层细胞（如NIH-3T3)。

2．试剂小牛血清或胎牛血清、无血清DMEM培养基、含10％胎牛血清的DMEM培养基、Hanks液或PBS溶液（过滤除菌或高压灭菌）。

3．仪器离心机、C0₂培养箱等。

【方法】

1．取培养在含血清培养基中的指数生长期的悬浮细胞，或贴壁单层细胞培养至汇合密度为30％时，收集细胞2000r/min，离心5分钟，用预热37℃的pH7.4的PBS或无血清培养液洗2次。

2．根据细胞种类不同，将细胞重新悬浮于无血清培养液或极低血清浓度（如将胎牛血清浓度下调至0.5%）的培养液中，置37℃,5% C0₂培养箱中孵育。

【结果】

1．如用REF-52细胞在无血清培养液中，血清饥饿24～48小时后细胞可稳定停滞在G0期。

2．如NIH-3T3细胞培养在仅含0.5％血清的培养基中，即可在血清饥饿24～48小时后进入G0期状态。

3．停滞在G₀期状态的细胞重悬浮于正常生长所需血清浓度（10％～20％）的培养液中，细胞将受到刺激重新进入细胞周期，12小时后进入S期，进入S期的时间可因细胞类型不同，有些细胞可短至6小时或长至20小时不等。

【注意事项】

1．也可用氨基酸饥饿法获得大量的G₀期细胞。当撤除培养液中的一种必需氨基酸—异亮氨酸，造成氨基酸饥饿状态，也可使细胞进入G₀/G₁样状态，但用无异亮氨酸培养基时，由于培养基中需加血清，必须要清除血清中游离的异亮氨酸，故血清要经过透析预处理。因此法手续烦琐，而且细胞在无异亮氨酸的培养液中需培养30～42小时，拖长了试验时间。该试验拖长饥饿时间会增加对细胞的毒性，常引起不可逆的生长终止。

2．饥饿处理后的细胞要比正常指数生长期的细胞脆弱，故实验操作要细心、轻盈，避免不必要的刺激，如重悬浮前的离心，应使用相对低速（1000r/min, 5分钟）；又如饥饿处理后的贴壁细胞，其黏附瓶壁的能力不如正常细胞牢固，故在换去无血清或无氨基酸培养液时，加入完全培养液时也要轻盈和谨慎，以免细胞丢失。