在结缔组织和黏膜上皮内的嗜碱性粒细胞，称肥大细胞（mast cell)，其结构和功能与嗜碱性粒细胞相似。肥大细胞在皮肤、呼吸道和消化道的结缔组织中较多。肥大细胞参与超敏反应。

（一）皮肤肥大细胞培养

【材料】

1．组织来源手术切除的皮肤。

2．培养用试剂

(1）清洗液：改良的Tyrode液，含137mmol/L NaC1,5.55mmo1/L葡萄糖、10mmol/L HEPES,2.7mmo1/L KCI,lmmol/L CaC1₂、0.36mmo1/L NaH₂P0₄和1 mmol/L MgC1₂。

(2)消化液：1g/L透明质酸酶和1g/L胶原酶(11,V/V）混合消化液，用含10mmol/LHEPES和20% FBS的HBSS配制。

3.培养基配方和制备RPMl 1640，添加10% FBS,25mmo1/L HEPES,25mmo1/L谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100U/ml庆大霉素。调整为pH 7.2。

4．实验器材手术刀、止血钳、解剖剪和解剖镊，培养皿或培养瓶等。

【方法】

1．取材切开皮肤，剪取约3cmx4cm皮片。将皮片放入培养皿内，用冲洗液清洗3次。

2．消化用手术刀将皮片垂直切成约1 mm2小块，放入三角瓶中，然后加入25 ml消化液，在培养箱内静止消化4小时。将三角瓶移入37℃恒温水浴振荡器内，振荡消化45分钟。

3．分离细胞用吸管轻轻吹打组织块，再用孔径为0.75 mm的不锈钢滤网滤出组织块。收集滤液，在4℃条件下进行500r/min离心5分钟。弃去上清液，用预冷的冲洗液混悬沉淀细胞，进行500r/min离心5分钟。

4．接种与培养弃去上清液，用培养液重悬沉淀细胞，调整细胞密度，使混合细胞中的肥大细胞达到2x10⁵个／ml,37℃培养12小时。轻轻摇晃培养皿，收集含有肥大细胞的培养液。然后，将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中培养。

【结果】

每克皮肤可取得（(6.6～8.6)x10⁵个肥大细胞，细胞存活率超过95%。在细胞悬液中，有核细胞中3％～5％是肥大细胞。初次培养12小时后，明显贴壁的细胞是成纤维细胞、巨噬细胞和内皮细胞等。肥大细胞附着能力较弱，轻轻摇晃培养皿或培养瓶即可得到。在此培养条件下，肥大细胞最长存活时间为3～4天。肥大细胞呈圆形或卵圆形，细胞核小，呈圆形或椭圆形，染色浅，位于细胞中央。

【注意事项】

1．培养12小时后，收集肥大细胞时操作应仔细，以免取到其他细胞。

2．切取皮片时，应仔细剥除皮下组织等无关组织。