巨噬细胞（macrophage）主要分布于肺、脾、淋巴结、胸膜腔和腹膜腔等处。巨噬细胞属免疫细胞，它们的主要作用是清除体内衰老损伤或凋亡的细胞，以及免疫复合物和病原体等抗原性异物。巨噬细胞是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2～3周，多用做原代培养，难以长期生存。

主要包括腹膜腔巨噬细胞（peritoneal macrophage）和肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage)两种细胞。

（一）腹膜腔巨噬细胞培养

【材料】

1．组织来源死亡胎儿的腹膜。

2．培养用试剂清洗液为HBSS和不含Mg²⁺和Ca²⁺的CMF-Hanks液。

3．培养基配方和制备常用RPMI 1640，含有10% FBS,l00U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。也可用DMEM或MEM，含有10% FBS,15mmol/L HEPES,3.5g/L葡萄糖、584mg/L谷氨酰胺、IOOU/ml青霉素和100ug/ml链霉素。

4．实验器材止血钳、解剖剪和解剖镊。

【方法】

1．取材将5～10ml冲洗液注入腹膜腔内，用吸管反复冲洗腹膜腔的细胞。

2．分离细胞将腹膜腔的细胞悬液吸入离心管中，进行1000r/min离心10分钟，离心2次。

3．接种与培养用培养液重悬沉淀细胞，将细胞悬液加入培养皿内，培养2小时。弃去培养液，用CMF-Hanks液清洗2次，除去漂浮的细胞，得到附着于培养皿底壁的巨噬细胞。采用酶消化或刮取的方法取出贴壁的巨噬细胞，进行1000r/min离心10分钟。用培养液混悬沉淀细胞，进行细胞计数，将细胞浓度调整为（1～3) x10⁶/ml，进一步培养。

【结果】

自腹膜腔洗出的细胞除巨噬细胞以外，还含有淋巴细胞等细胞。最终获得的细胞中巨噬细胞占95％以上。巨噬细胞大小约50 um，存活1～3周，一般不分裂。直接从腹膜腔取得的巨噬细胞为静止性细胞，伪足不明显，呈圆形。经硫代乙醇酸盐诱导可获得大量的炎性巨噬细胞，细胞有较强的运动和吞噬能力，多呈梭形。

【注意要点】

1．由于巨噬细胞的附着能力很强，酶消化法和刮取法都可损伤细胞。因此，应注意刮取速度和酶消化时间。

2．用吸管冲洗腹膜腔细胞时，尽量减少吸管对肠壁或腹壁的摩擦，以免混入成纤维细胞和上皮细胞。

（二）肺泡巨噬细胞培养

【材料】

1．组织来源死亡胎儿气管、支气管和肺泡内的灌洗液。

2．培养用试剂冲洗液为HBSS或不含Ca²⁺和Mg²⁺的CMF-PBS。

3．培养基配方和制备常用RPMI 1640，含有10% FBS,100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。也可用MEM或DMEM，含有10% FBS, 584mg/L谷氨酰胺、15mmol/L HEPES,3.5g/L葡萄糖、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。

4．实验器材止血钳、手术刀、解剖剪和解剖镊。

【方法】

1．取材用注射器将预冷的冲洗液注入气管，使肺扩张，然后洗出气管、支气管和肺泡内的细胞。也可在原位进行灌洗。

2．分离细胞将冲洗液吸入离心管，进行1000r/min离心10分钟，离心2次。

3．接种与培养用培养液混悬沉淀细胞，将细胞悬液加入培养皿内，培养2小时。吸去培养液，用不含Mg²⁺和Ca²⁺的CMF-PBS清洗2次，得到附着于培养皿底壁的巨噬细胞。采用刮取或酶消化法取出贴壁的巨噬细胞，进行1000r/min离心10分钟。用培养液混悬沉淀细胞，进行细胞计数，将细胞浓度调整为（1～3)x10⁶个／ml，进一步培养。

【结果】

洗出的细胞中90％是巨噬细胞，经培养获得的细胞中巨噬细胞占98％以上。取得的巨噬细胞为静止性细胞，伪足不明显，呈圆形。

【注意要点】

1．避免血液进入气管，以免污染。

2．注射压力不宜过大，否则损伤肺组织，引起出血或冲洗液渗漏。