根据抗癌药物作用后存活的靶细胞对放射性核素，3H-TdR掺入情况，可检测出靶细胞对不同抗癌药物的敏感度。

【材料】

1．切除或活检钳取的肿瘤组织。

2．培养基RPMI 1640完全培养基（RPMI 1640 +15％胎牛血清+1％谷氨酰胺+1% HEPES,胰岛素1 ug/ml,氢化可的松0.1 ug/ml，青霉素、链霉素分别为50u/ml和50ug/ml)。

3．抗癌药物配成3个对数浓度（0.1PPC,1PPC,l0PPC），3H-TdR 3.7MBq/10ml,40％三氯乙酸（TCA)，乙醇，闪烁液等。

4. 96孔培养板，玻璃纤维滤纸，闪烁瓶等。

5．液闪检测仪。

【方法】

1．制备肿瘤细胞悬液同前，调整细胞浓度为（4～5)x10⁵/ml。用微量移液器加细胞悬液于96孔培养板，每孔200ul。置37℃,5% CO₂孵箱中培养30分钟。

2．抗癌药物的每种浓度设3个复孔，向上述培养的细胞孔中加药20ul孔，对照孔加RPMI 1640液，继续培养2～3小时，每孔加3H-TdR 3.7kBq,1小时后终止培养。

3．收集细胞，用4％三氯乙酸固定后，用玻璃纤维滤纸抽滤细胞，并以三氯乙酸和乙醇反复洗涤，烤箱烘干备用。

4．将烘干滤纸置闪烁杯中，加闪烁液进行液闪测定，计算各种抗癌药对肿瘤细胞3H-TdR掺入的抑制率。敏感标准以实验孔cpm均数较对照孔cpm均数低50％以上者，即掺入抑制率≥50％为敏感，<50％为抗药。

上述几种测定肿瘤细胞药物敏感性的方法中，致死细胞染色法较为直观迅速，操作简便，不需要昂贵的仪器和试剂，但重复性相对较低，且锥虫蓝不能使死细胞100％着色，还有些抗癌药物通过“增殖死亡”的方式起作用，肿瘤细胞经此种药物的作用，只有在分裂增殖之后才死亡，会给检测结果造成误差。MTT法灵敏度高，重复性好，受主观因素的影响小，简便快速，是目前较常采用的方法。3H-TdR掺入法测定结果稳定可靠，但其操作烦琐，需要昂贵的仪器和特定的环境，易造成放射性污染，近年来已较少采用。

为使体外肿瘤细胞药敏试验反映出体内药物作用的真实情况，必要时可做浓度一细胞毒曲线及时间一细胞毒曲线。因为有的药物作用表现为浓度依赖性，如某些烷化剂，抗生素类药物；有的表现为时间依赖性，如某些抗代谢类药物，植物性药物等。对药物作用最适剂量及最适时间的摸索有助于使筛选的抗肿瘤药物在体内充分发挥其生物学活性，达到杀灭肿瘤细胞，抑制肿瘤生长的目的。另外，还可通过体外肿瘤药敏试验探索联合用药的效果，为选择最佳的药物配伍提供可靠的依据。