一、玻璃器皿和用具的清洗

在植物组织培养中，细胞对任何有害物质都十分敏感，因此对新的或用过的培养器皿都要严格清洗。植物组织培养器皿清洗的要求比较高，每次实验后器皿都必须及时清洗，不同的器皿清洗方法和程序也有所不同，必须分别进行处理。

1．玻璃器皿

提供细胞生长的玻璃表面不但要清洗干净。清洗玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，且不能残留任何毒性物质。为了保证清洗的质量，一般玻璃器皿的清洗分为4个步骤。

浸泡：新的玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性。并带有一些如铅和砷等对细胞有毒的物质，同时常有许多灰尘于涸在上面，使用前必须彻底清洗。先用自来水初步刷洗，在5％稀盐酸溶液中浸泡过夜，以中和其碱性物质。使用后的玻璃器皿应立即浸入清水中，避免器皿内蛋白质干涸后黏附于玻璃上难于清洗。浸泡时要将器皿完全浸入水中，使水进入器皿内而无气泡空隙遗留。

刷洗：经浸泡后的玻璃器皿尚需刷洗，一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉进行，以去除器皿内外表面的杂质。刷洗时有两点需注意，一是防止损坏器皿内表面光洁度以免影响细胞生长。所以应选择软毛毛刷和优质的洗涤剂，刷洗时用力不要过猛。二是不能留有死角，要特别注意瓶角等部位。刷洗后要将洗涤剂冲净，晾干。

洗涤液浸泡：洗涤液由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成，具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。经洗涤液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗掉的微量杂质可被完全清除。

洗涤物品时可以根据需要选择不同强度的洗涤液，其成分及用量见表1-2。

表1-2几种常用洗涤液的配制和使用方法

新配制的洗涤液为棕红色。经多次使用、水分增多或遇有机溶剂时成为绿色，这时表示洗涤液已失效，应废弃而重新配制。

清洁液本身具有强腐蚀作用(玻璃除外)，因此在配制及使用时需小心，注意安全。配制时注意保护身体裸露部分及面部，要戴耐酸手套、围以耐酸围裙，防止损伤皮肤及烧坏衣服。配制过程中，要先将重铬酸钾完全溶于水中(必要时可加热帮助溶解)，然后缓慢加入浓硫酸。由于加入浓硫酸时将产生热量，因此配制的容器宜用陶瓷或塑料器皿，加入浓硫酸时要缓慢而不能过急，以免热量产生太多，导致容器破裂，发生危险。浸泡器皿时同样要注意防止烧伤，轻轻将器皿浸入，使之内部完全充满洗涤液，不留气泡，一般最好浸泡过夜，至少为6h以上。

冲洗：玻璃器皿经浸泡后必须用流水冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，必须重复10次以上，直至清洁液全部被冲净、不留任何残迹为止。再用蒸馏水漂洗2次或3次，烤箱内烘干备用。

2．玻璃滤器

玻璃滤器以烧结玻璃为滤板，固定在一玻璃漏斗上。主要用于各种培养用液的过滤除菌。因容易堵塞滤板小孔，不宜单独过滤黏稠液体。此种滤器只能连接真空泵在负压条件下抽滤，不能施加正压，在每次使用后清洗也特别麻烦，整个清洗过程约需一周，具体方法如下。

(1)自来水漂洗：用洗衣粉擦洗(用手，不得用毛刷)，自来水漂洗，滴滤过夜。

(2)自来水抽滤3～5次至无白沫，水滴滤过夜。

(3)洗涤液抽滤1次，洗涤液滴滤过夜。

(4)自来水漂洗抽滤5次，水滴滤过夜。

(5)蒸馏水抽滤3次，蒸馏水滴滤过夜。

(6)烤于备用。

3．胶塞、盖子等杂物

植物组织培养中使用的胶塞、培养瓶盖子、针头都不能用清洁液浸泡。清洗过程中，新的胶塞因带有滑石粉，应先用自来水冲洗干净，再进行常规清洗；用后的胶塞、盖子应及时浸泡在清水中，用洗涤剂刷洗。针头需用自来水冲洗干净，然后置入2％NaOH中煮沸10～20min，冲洗干净；再以1％稀盐酸浸泡30min，冲洗，用蒸馏水漂流2次或3次，晾干备用。

4．塑料器皿

植物组织培养使用的塑料器皿主要有培养板、培养皿及培养瓶等。这些产品主要是进口的一次性商品，已消毒灭菌并密封包装，打开包装就可以使用。但目前我国大部分实验室都尚未能完全作一次性使用，仍需要经过清洗和消毒灭菌来反复使用。通常清洗方法是：用后立即以流水冲净或浸入清水中，防止干涸。在超声波清洗机上加入少量洗涤剂清洗，用流水冲洗干净，浸泡在清洁液中过夜，用流水冲洗干净，蒸馏水漂洗2次或3次，晾干备用。也可采用下述步骤：器皿经冲洗干净→晾干→2％NaOH浸泡过夜→自来水冲洗→5％盐酸浸泡30min→流水彻底冲洗→蒸馏水漂洗。

5．包装

植物组织培养的器皿要清洗、晾干。在消毒前必须进行包装，以便消毒及储存，防止落入灰尘及消毒后再次被污染。一般用皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布等作为包装材料，对培养瓶、滤器、存放培养液用盐水瓶、装吸管和胶塞(或培养瓶盖子)的消毒瓶等的瓶口部分做局部包装密封，再用牛皮纸或布包起来备用。对比较小的培养皿、加样器吸头等可以全包装封闭。注射器、金属器械可直接装入铝饭盒内。对重复使用的培养板则用优质塑料纸严密封口。