SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulphate—polyacylamide gel electrophorsis，SDS—PAGE)又称变性条件下的凝胶电泳、解离凝胶电泳。其分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。蛋白质的电泳迁移率与所带的电荷无关，而只与分子大小有关，因此，可从迁移率测定蛋白质亚基分子大小。与光散射、渗透压、超离心法等分子量测定方法相比，本法不需要昂贵的仪器，所需样品量少，操作简便，重复性好，因此成为测定蛋白质亚基分子量最广泛的使用方法。

在各国药典中均有收载应用实例。

(1)仪器装置

恒压或恒流电源、垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具。

(2)试剂

①30％丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g，加水至200ml,滤纸过滤，避光保存。

②分离胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷36.3g，加水70ml，用盐酸调节pH值至8.8，加水至100ml。

③浓缩胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g，加水70ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水至100ml。

④电极缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、甘氨酸28.8g、十二烷基硫酸钠1.Og，加水至1000ml。

(3)操作法

①制胶 用30％丙烯酰胺溶液一分离胶缓冲液一20％十二烷基硫酸钠溶液一10％过硫酸铵溶液(新鲜配制)一四甲基乙二胺一水(5.0：1．5：0.08：0.1：0.01：5.3)制成分离胶液，灌入模具内至一定高度(剩余体积留作制备浓缩胶用)，用水封顶，聚合完毕，倾去水层。再用30％丙烯酰胺溶液一浓缩胶缓冲液一20％十二烷基硫酸钠溶液一10％过硫酸铵溶液(新鲜配制)一四甲基乙二胺一水(0.8：1．3：0．025：0．05：0．005：2．4)制成浓缩胶液，灌在分离胶上，插入样品梳(如为圆盘电泳，用水封顶)，待浓缩胶液聚合后，小心除去样品梳或水。

②对照品溶液和供试晶溶液的制备 照各品种项下的规定。

③电泳 垂直板电泳：恒压电泳，初始电压为80V，进入分离胶时调至150-200V，当溴酚蓝迁移胶底处，停止电泳。圆盘电泳：调节电流使每管8mA。

④固定与染色 ’

I．考马斯亮蓝染色

A．试剂

a.固定液 称取三氯醋酸5g，加水200ml溶解后，加甲醇200ml，再加水至500ml

b.染色液 称取考马斯亮蓝R250 0.5g，加水200ml溶解后，加甲醇200ml与冰醋酸50ml，再加水至500ml。

c.脱色液 取甲醇400ml、冰醋酸100ml，加水至1000ml，充分混合。

d.保存液 取冰醋酸75ml，加水至1000ml，摇匀。

B．固定与染色 电泳完毕，取出胶片(条)，置固定液中30分钟，取出胶片(条)，置染色液中1～2小时，用脱色液脱色至凝胶背景透明后保存在保存液中。

II．银染色

A.试剂

a．硝酸银溶液取硝酸银0.8g，加水至4.Oml，将此溶液滴加到0.1mol／L氢氧化钠溶液20m1与25％氨溶液1.5ml的混合液中，摇匀，用水稀释至100ml。

b．固定液 取甲醇50ml、37％甲醛溶液54μl，加水至100ml。

c．显色液 取1％枸橼酸溶液2.5ml、37％甲醛溶液270μ1，加水至500ml。

d.终止液 取冰醋酸100ml，加水至1000ml。

B．固定与染色 胶片浸在固定液中至少2h后弃去固定液，用水浸洗至少lh胶片置l％戊二醛溶液中15min后，用水洗2次，每次15min；胶片置硝酸银溶液中15min后，用水洗3次，每次15min;胶片置显色液中，待各带显出后置终止液中。

⑤结果判断 用卡尺或用扫描定位法测量溴酚蓝指示剂和蛋白迁移距离(如为圆盘电泳还应测量染色前后胶条长度，垂直板电泳胶片厚度低于1mm，染色前后胶片长度基本不变)。

供试品主成分迁移率应与对照品迁移率一致。

分子量：以R’m为横坐标，标准蛋白质的分子量对数为纵坐标，进行线性回归，由标准曲线求得供试品的分子量。

纯度：取胶片(条)，置薄层扫描仪，以峰面积按归一化法计算。